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一种检测猪圆环病毒不同型别的三重荧光定量PCR引物组、试剂盒及应用
本发明提供了一种检测猪圆环病毒不同型别的三重荧光定量PCR引物组、试剂盒及应用,涉及生物检测技术领域。本发明根据Genbank中猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4型的保守序列合成引物和探针,同时还构建了试剂盒,并用于猪疫病检测。本发明利用建立的荧光定量PCR体系对来自浙江省内83份猪组织样品进行检测,结果显示所述引物组特异性良好,重复性和稳定性俱佳,并且具有较高的一致性,准确率较高。在本发明中,PCV2、PCV3最低检测值均为10拷贝/μl,而PCV4最低检测值为1拷贝/μl,克服了当前猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4三重PCR检测方法敏感性低,易污染实验室等缺点。
一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用
本发明提供了一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用,所述毛霉菌分型检测的引物探针组合包括扩增并检测根霉属的引物对和探针、扩增并检测毛霉属的引物对和探针、扩增并检测犁头霉属的引物对和探针、扩增并检测根毛霉属的引物对和探针、扩增并检测小克银汉霉属的引物对和探针中的任意一种或至少两种的组合;所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的检测位点位于28SrRNA序列区域和/或ITS2rRNA序列区域。本发明还提供了一种毛霉菌分型检测的试剂盒及其以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法以及一种毛霉菌分型检测的装置。所述引物探针组合具有良好的特异性与灵敏度,检测结果准确,应用价值极高。
实时荧光定量PCR检测试剂盒、判断槟榔幼苗缺锌状态的方法
本发明属于生物技术领域,公开了一种实时荧光定量PCR检测试剂盒、判断槟榔幼苗缺锌状态的方法,实验基地进行槟榔缺锌的处理;进行样品的采集;进行ZIP家族分析和引物设计;进行引物的特异性验证;进行实时荧光定量PCR检测。本发明的基于ZIP家族的实时荧光定量的槟榔缺锌的诊断试剂盒,只需提供样品按照所提供的方法进行检测,即可确定槟榔幼苗缺铁和缺锌状态的原因,为后续预防提供依据。本发明通过结构域的差异获得ZIP家族基因,并通过实时荧光定量PCR验证,获得可以判断槟榔缺锌的状态的AcZIP基因;通过引物凝胶成像以及熔解曲线说明了引物的特异性,实时荧光定量PCR结果的相互印证说明了结果的可靠性。
检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法
本发明属于生物技术领域,公开了一种检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法,快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒,包括一组基于ZIP家族的检测引物以及内参引物;所述基于ZIP家族的检测引物,包括特异性引物ZIP1和特异性引物ZIP2。本发明利用缺铁处理引起基因表达量的差异,根据差异基因在不同处理的表达量的趋势变化不同,得到检测槟榔缺铁的检测引物,对后续处理提供依据;试剂盒内的检测引物具有很高的特异性,只需提供正常的样品以及出现黄化的样品,即可通过实时荧光定量PCR技术判断槟榔幼苗是否缺铁的情况,具有特异性强、易于操作、结果可靠的特征,具有极大的潜在应用价值。
一种猪呼吸道病三重荧光PCR检测试剂盒及其检测方法
本发明公开了一种猪呼吸道病三重荧光PCR检测试剂盒及其检测方法,该方法是利用3种不同颜色编号标记的TaqMan荧光探针,分别标记猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌的特异性基因探针,使得该方法能够在一个反应中实现同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌靶基因的检测方法,该方法检测灵敏度高,特异性好,操作简便,临床上具有极高的应用价值。
一种鸡感染空肠弯曲杆菌的分子标记及检测方法和应用
本发明公开了一种鸡感染空肠弯曲杆菌的分子标记及检测方法和应用,该分子标记为鸡盲肠组织gga-miR-24-3p的异构体isomiR-1,核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。通过以鸡盲肠组织总RNA反转录的DNA为模板进行PCR扩增,经内参校正后,待检鸡isomiR-1的表达量超过阴性鸡6倍以上则判定为空肠弯曲杆菌阳性鸡。本发明通过检测鸡盲肠组织gga-miR-24-3p异构体isomiR-1的表达水平,以确定其是否已感染空肠弯曲杆菌,是一种新型的分子标记方法。
一种用于检测微小残留病灶的组合物及试剂盒
本发明提供了一种检测BCR/ABL(P210)的引物以及探针,从而建立一种新的超灵敏、检测重复性好的微小残留病检测试剂盒。本发明通过设计针对BCR-ABL融合基因特异性的引物及探针序列,通过对K562阳性细胞的扩增,其检测灵敏度可以达到10~(-6),具有极高的灵敏度。且对确诊为CML的患者不同治疗时期的融合基因BCR-ABL的拷贝数进行检测,在不同的治疗时期CR1、CR2、CR3,检测的融合基因的拷贝数和治疗的趋势相一致,且和进口的试剂盒的检测一致。其检测过程简单方便、精密度、准确度和特异性高,得以保证检测结果的正确性。
一种用于预测儿童肥胖症的组合物及其应用
本发明提供了一种预测儿童肥胖症的组合物及相应的引物组。本发明根据产气夹馍菌(Clostridium)、拟杆菌(Bacteroides)、双歧杆菌(Bifidobacterium)以及乳酸杆菌(Lactobacillus)的16srDNA序列,设计能够扩增产气夹馍菌(Clostridium)、拟杆菌(Bacteroides)、双歧杆菌(Bifidobacterium)以及乳酸杆菌(Lactobacillus)的引物及探针。通过荧光定量PCR方法进一步测定粪便中产气夹馍菌(Clostridium)、拟杆菌(Bacteroides)、双歧杆菌(Bifidobacterium)以及乳酸杆菌(Lactobacillus)的含量,来判定儿童是否是患有肥胖症,肥胖儿童粪便中的乳酸杆菌以及产气夹馍菌明显高于正常儿童,而拟杆菌以及双歧杆菌的量明显低于正常儿童。本发明的方法具有较高的特异性及灵敏度,且操作简单,准确,适合推广应用。
一种宏基因组绝对定量的检测方法及其应用
本发明提供了一种宏基因组绝对定量的检测方法及其应用。所述检测方法中在待测样本DNA中加入微生物绝对定量用参照DNA,经过两轮扩增之后,使用测序平台测序和基因组序列比对,实现所述待检测样本中微生物含量的绝对定量。所述检测方法能够快速建立原核生物,真核生物和真菌检测体系,降低检测成本,且灵敏度较高,是一种准确、可靠的能对单位质量样本中的微生物的含量进行绝对定量方法。