本发明提供了一种基于等温扩增-CRISPR/Cas12a技术检测弓形虫DNA的试剂盒及其应用,属于寄生虫检测技术领域。本发明提供了一种用于特异性检测弓形虫DNA的crRNA,核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。同时本发明还提供了检测弓形虫DNA的试剂盒,包括所述crRNA、Cas12a蛋白和荧光报告基团标记的ssDNA。利用Cas12a靶向切割靶标序列和切割任意单链DNA序列的特性,通过crRNA靶向弓形虫DNA序列,激活Cas12a活性,从而Cas12a对FQ-ssDNA序列进行酶切,发出的荧光信号来指示检测样品中是否含有弓形虫DNA。所述试剂盒具有操作简便,检测快速的特点,具有较高的应用价值。