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最新技术
一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用
本发明公开了一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用,属于DNA重组技术领域。本发明公开的一种靶向性三展示噬菌体,利用噬菌体展示技术将编码P53蛋白N端表位多肽SV、MP及DE分别定向克隆到丝状噬菌体的PIII、PVIII及PVI基因中,制备出PIII蛋白展示肽SV、PVIII蛋白展示肽MP及PVI蛋白展示肽DE的靶向性三展示噬菌体phage-SV-MP-DE。该噬菌体作为一种新型生物制品,具有特异性强、灵敏度高、制备简单、成本低廉等优点,能够应用于肿瘤患者血清P53抗体的检测。
一种基于PAMAM介导的生物素/链霉素级联放大免疫磁富集牡蛎中诺如病毒的方法
本发明公开了一种基于PAMAM介导的生物素/链霉素级联放大免疫磁富集牡蛎中诺如病毒的方法。将PAMAM进行生物素修饰,再结合抗诺如病毒抗体,得到PAMAM-biotin-mAb,然后将PAMAM-biotin-mAb添加到牡蛎提取液中孵育,再加入链霉亲和素包被的磁珠孵育,然后磁分离,洗脱获得富集的牡蛎中诺如病毒。基于PAMAM介导的生物素/链霉素级联放大免疫磁富集方法,可以特异高效捕获牡蛎中的目标诺如病毒,是对传统富集方法非特异性的重要弥补,富集效率与检测周期均优于常规免疫磁富集方法。
PLPP1在利用CAR-T技术防治实体瘤中的应用
本申请属于肿瘤防治技术领域,具体涉及磷脂磷酸酶PLPP1在利用CAR-T技术防治实体瘤中的应用专利申请事宜。利用CAR-T技术防治实体瘤时,PLPP1用于增强T细胞分泌杀伤因子能力,同时用于增强T细胞的增殖能力。本申请中,通过比对外周血中激活的T细胞和肿瘤组织中激活的T细胞的差异,初步认为肿瘤微环境中T细胞脂质代谢异常,而PLPP1分子是造成这些异常的主要原因。基于此研究,发明人选择实体肿瘤靶点的MSLN-CAR为模型,以研究PLPP1对CAR-T功能的影响,初步结果表明,利用PLPP1改造后,可明显增强CAR-T细胞在肿瘤微环境中的功能及增殖能力,进而可为相关疾病的防控奠定良好的技术基础。
ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用
本发明公开了ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用,属于医药技术领域。本发明经过研究发现,ETV4基因可以用于重编程增生性瘢痕成纤维细胞,既开拓了ETV4基因新的应用领域,也开拓了新的重编程增生性瘢痕成纤维细胞的基因,具有积极的药学价值和广泛的社会意义。
一种人源诱导肝向分化干细胞的制备方法及其应用
本发明公开了一种人源诱导肝向分化干细胞的制备方法及其应用,所述方法包括将人源诱导多能干细胞(human induced pleuripotent stem cell,hiPSC)接种在matrigel包被的六孔细胞培养皿上,用mTeSR~(TM)1干细胞培养液进行培养。待干细胞生长克隆明显时,向干细胞培养液中加入激活素A(activin A)处理所述人iPS干细胞进行内胚层的诱导分化,得到内胚层细胞;然后将所述内胚层细胞在含有骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein-4,BMP-4)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)的RPMI+B-(27)培养基中培养,使得所述内胚层细胞定向分化,得到肝向分化干细胞。干细胞肝向分化移植方法减少肝向分化时间,增强干细胞在α-1抗胰蛋白酶缺乏症转基因小鼠肝脏体内的再生能力和成熟度,减少费用,该技术在临床应用具有广阔的前景。
一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法
本发明公开了一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法,该方法以CHO细胞为表达系统,通过在细胞培养过程中添加半乳糖、尿嘧啶核苷和四水氯化锰后能有效提高抗体半乳糖基化水平,并且可以提高抗体的活性。
一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型
本发明公开了一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型。其制备方法为:1)构建含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体;2)利用步骤1)所述的含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体,制备含有KGF基因启动子的慢病毒溶液,并进一步感染间充质干细胞,筛选稳转株。本发明使用对疾病具有治疗作用的间充质干细胞为模型,以编码间充质干细胞分泌的可溶性因子的KGF基因的启动子为靶点,筛选促进间充质干细胞分泌可溶性因子KGF的潜在药物,为使用药物与间充质干细胞联合治疗急性肺损伤,增强疗效,奠定了基础。
胆管癌胆汁外泌体的提取方法
本发明公开了胆管癌胆汁外泌体的提取方法,包括步骤一:标本的采集;步骤二:外泌体的提取:离心前一天,胆汁标本从冰箱取出置于4度冰箱融化,得到50ml黄色胆汁;胆汁以4°、300g、5min离心1次,然后取上清液;上清以4°、2000g、10min离心1次,然后取上清;得到的50mL上清液稀释至60mL,以4°、12500g、离心30min,离心结束后取上清液;得到的胆汁上清液稀释至70mL,过0.22um筛子后,以4°、120000g、离心2h,得到底部沉淀,将该沉淀用无菌D-PBS反复吹打溶解后转移至EP管中,共得到200uL外泌体悬液,NTA检测后置于-80°冰箱中保存;步骤三:外泌体的鉴定。通过标本的采集、外泌体的提取、外泌体的鉴定,进而能够实现对胆管癌胆汁外泌体的提取,在临床诊疗中有巨大的潜在应用价值。
胃癌原代细胞的培养基及培养方法
本发明提供了一种实现胃癌原代细胞体外快速扩增的培养基和培养方法。本发明的胃癌原代细胞培养基包含初始培养基、Rho蛋白酶抑制剂、抗生素、胰岛素、非必需氨基酸、氢化可的松、霍乱毒素、谷氨酰胺、胎牛血清、以及选自B27添加剂和N2添加剂中的至少一种的添加剂。通过使用本发明的胃癌原代细胞培养基,采用条件重编程的培养技术,能够实现胃癌原代细胞的有效快速扩增,这样扩增得到的细胞保持了病人的病理特性,提高了胃癌原代细胞的培养成功率和细胞扩增速率,可以为患者的个性化治疗提供研究基础。
一种分离内耳FZD10阳性胶质细胞的方法
本发明涉及细胞分离和纯化领域,具体涉及一种分离内耳FZD10阳性胶质细胞的方法。本申请利用转基因鼠杂交使得内耳中的FZD10阳性胶质细胞获得荧光标记,从而便于后续通过流式分选获取纯化的内耳胶质细胞。本发明所采用的分离纯化技术能够最大限度的获取胶质细胞并保持细胞的活性,分选后FZD10阳性胶质细胞纯度达到98%以上,能够满足后续实验的需要,且分析纯化过程简洁快速,非常适用于后续实验研究。