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一种稳定产生牛病毒性腹泻病毒抗原的细胞系及抗体胶体金检测试纸条的制备方法
本发明涉及生物检测技术领域,特别涉及一种稳定产生牛病毒性腹泻病毒抗原的细胞系及抗体胶体金检测试纸条的制备方法。该细胞系按照以下方法制备:将牛病毒性腹泻病毒接种于敏感细胞系,通过有限稀释法筛选持续性感染细胞,进行克隆纯化和病毒滴度测定,确定滴度高于10~7-.~0TCID-(50)的细胞建系。本发明制备了可以持续稳定产生牛病毒性腹泻病毒抗原的细胞系,应用该细胞系不需要再接种毒种,按照正常细胞传代,既可节约毒种用量,又避免操作复杂易造成污染等问题,节省人力物力。本发明的牛病毒性腹泻病毒抗体胶体金检测试纸条具有特异性强、灵敏度高、简单快速、操作简单快捷等特点,易于推广,适用于基层养殖场检测,具有广阔的市场前景。
一种鱼类组织单细胞悬液的制备方法
本发明公开了一种鱼类组织单细胞悬液的制备方法,1)配制试剂与培养基,2)组织预处理,3)组织消化解离,4)终止消化,5)μm细胞过滤器过滤,6)获取目的组织单细胞悬液;7)测活细胞得率,本发明制备鱼类组织单细胞悬液的方法,能够实现低成本、快速、高效获得鱼类组织单细胞悬液,并保证解离的细胞保持良好活率,可应用于大范围的鱼类细胞的解离、分离纯化以及细胞系的建立,为鱼类单细胞、基因功能及遗传育种研究提供重要参考资料。
一种蜡梅原生质体的制备方法
本发明公开了一种蜡梅原生质体的制备方法,该方法包含:在黑暗条件下培养蜡梅的花药,诱导产生愈伤组织;将愈伤组织置于酶解溶液中,在振荡培养箱中黑暗培养,得到含原生质体的酶解液;其中,酶解溶液包含:纤维素酶和离析酶;在酶解液中加入适量W5溶液稀释,用细胞过滤器过滤;其中,W5溶液为氯化钠、氯化钙、氯化钾、2-(N-吗啉基)乙磺酸和水的混合液;将所得滤液离心,弃上清液,以获得含蜡梅原生质体的溶液。本发明的方法以蜡梅愈伤组织为材料制备原生质体,使用纤维素酶和离析酶酶解液组合,不受取材时间、数量的影响,酶解可得到平均1.11×10~6个/g的蜡梅原生质体产量,高效快速。
一种木本植物苹果果实细胞液泡蛋白的提取方法
本发明公开了一种木本植物苹果果实细胞液泡蛋白的提取方法,包括以下步骤:(1)以苹果果实为实验试材,从苹果果实细胞中提取出原生质体;(2)对步骤(1)中得到的原生质体进行分离得到液泡;(3)对步骤(2)中得到的液泡进行超低温冻融处理,得到苹果果实细胞液泡蛋白;(4)对步骤(3)中得到的液泡蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,最终确定获得苹果果实细胞液泡蛋白。本发明通过反复研究和试验在苹果果肉细胞中提取出液泡蛋白,提取方法效率高。
一种提高有效成分含量的杜仲悬浮细胞培养方法
本发明属于生物技术领域,具体是涉及一种提高有效成分含量的杜仲悬浮细胞培养方法,包括如下步骤,1)将杜仲无菌苗的幼茎或幼叶接种于培养基中培养,诱导得到杜仲愈伤组织,所述培养基中添加有植物生长调节剂;2)将杜仲愈伤组织接种于培养基中培养,得到杜仲悬浮细胞,所述培养基中添加有植物生长调节剂;3)在杜仲悬浮细胞中加入真菌多糖,或真菌多糖和茉莉酸甲酯的混合物,继续培养,得到提高有效成分含量的杜仲悬浮细胞;本申请可以有效的提高杜仲悬浮细胞中过氧化物酶活力,提高氨基酸等物质的含量。
一种外泌体的纯化方法
本发明提供一种外泌体的纯化方法,包括:(1)将富含外泌体的细胞培养液离心;(2)将步骤(1)得到的上清液和40%(w/v)碘帕醇溶液一起离心,得到外泌体粗提液;步骤(1)得到的上清液和碘帕醇的体积比为500~600:1;(3)将外泌体粗提液用缓冲溶液稀释4~6倍和外泌纯一起离心,外泌纯位于所述外泌体粗提液下部;外泌体粗提液和外泌纯的体积比为2:1~1.5;所述外泌纯为25~30%(w/v)的碘帕醇溶液;(4)分别收集步骤(3)离心分层后的产物。本发明的纯化方法通过对一定浓度的碘帕醇经过超速离心可以很快速的形成连续密度梯度,且能够用于较高纯度外泌体的分离,有利于提高获得的外泌体的纯度。
一种仿生胶原膜包被片及其制备方法
本发明公开了一种仿生胶原膜包被片及其制备方法。该方法包括:配制胶原重组缓冲液,将胶原的醋酸溶液与胶原重组缓冲液混合均匀,得到混合液,调节所述混合液pH为中性;将载体竖立浸泡在混合液中,保温处理,随后烘干,得到所述仿生胶原膜包被片。本发明通过简单的胶原自组装制备方法得到的仿生胶原膜包被片,具有如下优点:胶原与载体片贴合紧密,平整度好,操作简便,具有纳米纤维结构,且具有胶原体内独有的67nm周期性螺纹结构。
一种提高复合碳源稳定性的添加剂及其制备方法
本发明涉及复合碳源添加剂制备技术领域,具体为一种提高复合碳源稳定性的添加剂及其制备方法。包括乙酸钠、乙酸钾、甲醇、乙醇、丙三醇、催化酶、净化剂、水。通过对乙酸钠、乙酸钾的调配,增加微生物的渗透压使复合碳源内的微生物失去活性而提高复合碳源的稳定性。通过甲醇、乙醇的杀菌作用,使微生物的蛋白质变性而失去活性,或渗透进微生物细胞内使微生物细胞溶解,进一步提高复合碳源的稳定性。生物酶,可促进复合碳源内的糖分、纤维素分解,使复合碳源内的COD进一步提高。净化剂,可使复合碳源保持澄清,而含有净化剂的复合碳源,也能进一步提高对污水的净化能力。
两种基于低共熔体系的纤维素液体化制备通用微生物培养基的方法
本发明提出了基于低共熔体系的纤维素液体化制备微生物培养基的方法,该方法包括:1)将离子液体与纤维素进行第一混合处理,所述离子液体预先进行预热处理;2)将步骤1)所得混合液与蒸馏水进行第二混合处理;3)将步骤2)所得混合液进行过滤处理;4)将步骤3)所得滤液进行蒸馏水定容处理,以获得所述碳源。所述碳源制备的培养基可用于多种微生物的培养,且微生物生长状态较佳。
多粘芽孢杆菌高产胞外多糖培养基及其应用方法
本发明涉及微生物技术领域,具体公开了一种多粘芽孢杆菌高产胞外多糖培养基及发酵方法。所述培养基包括种子培养基和发酵培养基,其中的发酵培养基包含有发酵调节物,所述发酵调节物由A和B两组分混合而成,其中组分A选自棕榈酰三肽-1和棕榈酰三肽-7中的一种或是两种的混合物,组分B选自积雪草苷和羟基积雪草苷中的一种或是两种的混合物,组分A和B质量比为4:1~1:2。本发明培养基应用于多粘芽孢杆菌发酵胞外多糖,能够有效提高胞外多糖产量,胞外多糖生产周期短,生产效率高。