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最新技术
一种重组硫酸软骨素酶AC及其制备方法与应用
本发明属于生物工程领域,具体涉及一种重组硫酸软骨素酶AC及其制备方法与应用。本发明使用分子克隆技术通过提取硫酸软骨素酶AC基因设计引物,经PCR扩增后与表达载体连接,构建重组表达载体;将重组表达载体转化至大肠杆菌,构建重组表达转化体,实现重组硫酸软骨素酶ABC-I蛋白的可溶性表达。构建过程操作简单,成本低。所构建的重组硫酸软骨素酶ABC-I蛋白表达量高、具有较高的酶活性,粗酶活性可达到5082 U/L。且稳定性好,37℃条件下的半衰期为11 h,4℃下的半衰期有28天。对提升我国ChSase AC的生物表达的技术水平具有重要的科学意义。
一种制备人肾脏组织单细胞悬液的消化酶及应用
本发明提供一种用于临床高效制备人肾脏组织单细胞悬液的消化酶及应用,所述消化酶包含ColⅡ、ColIV、ColⅠ、DNaseⅠ和透明质酸酶。通过该消化酶对肾脏组织进行酶解消化,具有单细胞占比高、细胞数多以及细胞活性高等优势。
一种融合蛋白、碱基编辑工具及其应用
本发明公开了一种融合蛋白、碱基编辑工具及其应用,所述融合蛋白基于中华链球菌来源的Cas9同源物的新型胞嘧啶单碱基编辑工具,包括经过密码子优化的Cas9nickase同源蛋白与脱氨酶APOBEC1、尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂(UGI)融合蛋白构成的碱基编辑器;以及含有上述融合蛋白的基因编辑工具或细胞表达系统及其应用。所述融合蛋白可以识别NHAAAA作为PAM,可编辑窗口为gRNA靶向序列范围内3-12位的胞嘧啶(C)。可实现特定碱基(C-to-T)的转变,拓宽了碱基编辑的靶向范围和应用范围。
聚合酶组合物和制造与使用其的方法
本发明提供适用于核酸聚合的组合物、方法、套组、系统和设备。确切地说,提供允许得到改进的核酸扩增的经过修饰的聚合酶和其生物活性片段,如经过修饰的Taq聚合酶。在一些方面,本发明提供具有与参考Taq聚合酶相比改进的热稳定性、精确度、持续合成能力和/或读取长度的经过修饰的聚合酶。在一些方面,本发明涉及适用于扩增方法并且在实际说明性实施例中适用于乳液PCR的经过修饰的聚合酶或其生物活性片段。
一种披发糖多孢菌来源的可降解生物胺的含铜胺氧化酶及其应用
本发明公开了一种披发糖多孢菌来源的可降解生物胺的含铜胺氧化酶及其应用,属于分子生物学技术领域。本发明从披发糖多孢菌中筛选获得了含铜胺氧化酶,该酶具有较强的降解生物胺的性能,降解谱广,并对乙醇有一定的耐受能力,对市售黄酒和市售酱油的总生物胺降解率分别为30.25%和18.29%,在黄酒、葡萄酒等发酵酒中具有一定的应用价值,有助于使发酵食品的安全性得到进一步提高。
一种醛醇氧化酶二聚体及其制备方法
本发明公开一种醛醇氧化酶二聚体及其制备方法,本发明通过基因融合的方式,将SpyTag、p53dim结构域、醛醇氧化酶以及SpyCatcher进行融合表达,得到了醛醇氧化酶二聚体,醛醇氧化酶二聚体显著提高了对甘油的氧化能力,而且对其它糖醇类底物的催化效率普遍提升了10~24倍。
热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用
本发明涉及基因工程领域,具体涉及热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用。所述葡萄糖氧化酶突变体通过将氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的葡萄糖氧化酶的第4位、第70位、第86位、第96位、第274位、第508位中至少一个氨基酸进行取代获得。本发明提供葡萄糖氧化酶突变体,与野生型葡萄糖氧化酶相比,其热稳定性有了显著的提升,有利于该酶在工业化生产中应用。本发明对来源于黑曲霉的葡萄糖氧化酶进行分子改造,通过定点突变技术和易错PCR方法提高了葡萄糖氧化酶的热稳定性,为葡萄糖氧化酶的工业化应用奠定基础。
突变型对羟苯基丙酮酸双氧化酶、其编码核酸以及应用
本发明涉及突变型对羟苯基丙酮酸双氧化酶(HPPD)蛋白、其生物活性片段以及包含编码所述蛋白或片段的核酸序列的分离的多核苷酸,其中所述突变型对羟苯基丙酮酸双氧化酶(HPPD)蛋白或其生物活性片段保留或加强了其催化对羟基苯基丙酮酸(HPP)转化为尿黑酸的性质,且对HPPD抑制剂的敏感性明显低于野生型HPPD。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、表达载体和宿主细胞,以及生产具有催化对羟基苯基丙酮酸(HPP)转化为尿黑酸的性质、同时对HPPD抑制性除草剂的敏感性明显降低的植物的方法。
一种用于血清抗体检测的猪丹毒丝菌GAPDH分子抗原多肽及其制备方法和应用
本发明属于生物医学技术领域,提供了一种用于血清抗体检测的猪丹毒丝菌GAPDH分子抗原多肽,所述GAPDH分子抗原多肽包含至少一个猪丹毒丝菌GAPDH表位ERepitope1或ERepitope2,其中GAPDH表位ERepitope1对应ERG-1多肽,其氨基酸序列为QLVSTDIIGMSY;ERepitope2对应的合成多肽为ERG-2,其氨基酸序列为:ERG-2A:HAYTNDQNTLDGPHAKGDLRRGRAA;或者ERG-2B:DQNTLDGPHAKGDLRRGRAAAQSII;或者ERG-2C:DGPHAKGDLRRGRAAAQSIIPNSTG;或者ERG-2D:KGDLRRGRAAAQSIIPNSTGA。上述猪丹毒丝菌的GAPDH分子抗原多肽与猪场常见细菌康复血清均不发生反应,具有高度的特异性,可以用于建立评估猪丹毒丝菌GAPDH免疫后血清抗体水平的检测方法。
分离的多肽、核酸及其应用
本发明提出了一种分离的多肽,该多肽与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比,所述多肽具有310位氨基酸突变。利用本发明提供的多肽可以高效制备肌肽,并且绿色环保,适于大规模生产。