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基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法
一种基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法,通过克隆出包含如Seq ID No.1所示的绿色荧光蛋白基因的载体pUC57-GFP后,将其与pET-30a载体序列重组得到重组质粒pET-GFP,进一步与如Seq ID No.5所示的glu1基因序列重组得到重组质粒pET-glu1-GFP,再基于重组质粒构建pET-glu1-GFP原核表达菌株,经培养得到用于定位真菌免疫调节蛋白细胞的glu1-GFP重组蛋白。本发明利用绿色荧光蛋白对真菌免疫调节蛋白进行细胞定位,能够准确、快速的鉴定出蛋白质是否进入细胞,为真菌免疫调节蛋白生物活性的探索提供了更加广阔的前景。
Pgk1作为靶点在制备或筛选治疗胃肠道疾病药物中的应用
本发明属于生物医药领域,具体涉及一种Pgk1作为靶点在制备或筛选治疗胃肠道疾病药物中的应用。本发明首先构建了表达Pgk1的重组益生菌,所述重组益生菌能够有效抑制细胞死亡、增强改善黏膜完整度、促进组织形态改善,对消化性溃疡和炎症性肠病的疗效显著,且效果高于临床药物;其次,本发明发现,激活Pgk1的药物能够有效的抑制细胞死亡、增强改善黏膜完整度、促进组织形态改善,对消化性溃疡和炎症性肠病的疗效显著;最后发现,喹唑啉衍生物能够激活Pgk1,有效的改善黏膜完整度、促进组织形态改善、恢复动物体重,对消化性溃疡病和炎症性肠病疗效显著,比现有临床药物活性高20-80倍,具有良好的临床应用前景。
一种生物法生产L-5-甲基四氢叶酸的方法
本发明公开了一种生物法生产L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的方法,是在大肠杆菌中敲除了分解代谢途径中的甲硫氨酸合成酶基因(metH),并引入了一条新的产L-5-MTHF的代谢途径构建了产L-5-MTHF的工程菌BL21-WL菌株或BL21(ΔmetH)-C1T菌株,通过对所构建的工程菌产L-5-MTHF的发酵条件优化,所述工程菌最大细胞干重产量可达445.94μg·g~(-1),比优化前提高了99.71%,达到出发菌株的10.0倍,换算为每升培养物的产量后可达1249.11μg,远大于目前报道中的以E.coli为宿主菌的L-5-MTHF产量(119.84μg·L~(-1))。预示本发明方法及构建的工程菌具有极大的应用价值和市场前景。
一种将L-色氨酸转化为色胺和D-色氨酸的方法
本发明公开了一种将L-色氨酸转化为色胺和D-色氨酸的方法,包括以下步骤:(1)对L-色氨酸进行消旋处理,获得含有D-色氨酸和L-色氨酸的母液;(2)向母液中投入色氨酸脱羧酶和辅酶PLP,在40-50℃、pH6.0±0.5的条件下特异性催化L-色氨酸转化成色胺;当母液中L-色氨酸含量降至0.001g/L或0.001g/L以下时结束反应,获得含有D-色氨酸和色胺的反应液;(3)调节反应液的pH值至12.0,使反应液中的色胺析出形成沉淀,分离得到色胺;(4)向分离出色胺后的反应液中加盐酸,使D-色氨酸析出,分离得到D-色氨酸。采用本发的方法可以将低价值的L-色氨酸同时转化为高价值的色胺和D-色氨酸;L-色氨酸的转化效率高,转化得到的色胺和D-色氨酸的纯度高。
一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体
本发明公开了一种重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白及其单克隆抗体,属于生物技术领域,本发明利用大肠杆菌表达与纯化重组人VASN蛋白LRR结构域蛋白,提供了重组人VASN蛋白LRR结构域表达载体,并对所诱导表达出的重组人VASN蛋白LRR结构域进行过Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化及鉴定,以重组VASN蛋白LRR结构域蛋白作为免疫原对小鼠进行免疫,利用细胞融合技术制备出针对VASN蛋白LRR结构域的杂交瘤细胞株,以及该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体能够高特异性地结合VASN抗原,具有很高的特异性。
稻纵卷叶螟钙粘蛋白Cry毒素结合区编码基因及其编码蛋白与应用
本发明首次公开了核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的稻纵卷叶螟钙粘蛋白Cry毒素结合区编码基因,以及其氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的编码蛋白,该稻纵卷叶螟钙粘蛋白的毒素结合区CmCad-CR6-MPED与Cry1Ac毒素具有结合作用,可以应用于预测稻纵卷叶螟Cry毒素抗性,若待测稻纵卷叶螟的钙粘蛋白Cry毒素结合区基因核苷酸序列与SEQ ID NO.14不同,则说明该稻纵卷叶螟受体发生基因突变,结合能力降低,昆虫对Cry毒素产生了一定抗性;该编码蛋白还可以用于筛选针对稻纵卷叶螟的Bt蛋白,若待筛选的Bt蛋白与编码具有高度亲和力,则必然会插入入稻纵卷叶螟中肠BBMV上,使上皮细胞膜破裂,可以快速筛选或改造对稻纵卷叶螟具有高毒力的Bt毒素杀虫蛋白。
腐食酪螨过敏原Tyr p 12编码基因、重组蛋白及其应用
本发明公开了一种腐食酪螨过敏原Tyr p 12编码基因、重组蛋白及其应用。本发明在对腐食酪螨基因组进行功能基因注释时发现一段基因与热带无爪螨第12组分Blo t 12具有同源性,因此本发明用RT-PCR从腐食酪螨Total RNA中扩增出这段编码,测序验证确定为Tyr p 12的编码基因,如SEQ ID No:1所示,通过将该基因依次经过密码子优化、人工合成基因片段,如SEQ ID No:2所示,将该人工合成基因片段克隆至pET28a(+)载体中、转化大肠杆菌、IPTG诱导表达、镍亲和柱层析纯化后,最终获得重组蛋白,将该重组蛋白应用于临床检测腐食酪螨阳性血清,其阳性率为27.27%(3/11)。本发明首次获得Tyr p 12的编码基因,并以此制备获得的重组蛋白用于制备精准医学检验过敏性疾病患者检验试剂中的应用。
一种重组硫酸软骨素酶AC及其制备方法与应用
本发明属于生物工程领域,具体涉及一种重组硫酸软骨素酶AC及其制备方法与应用。本发明使用分子克隆技术通过提取硫酸软骨素酶AC基因设计引物,经PCR扩增后与表达载体连接,构建重组表达载体;将重组表达载体转化至大肠杆菌,构建重组表达转化体,实现重组硫酸软骨素酶ABC-I蛋白的可溶性表达。构建过程操作简单,成本低。所构建的重组硫酸软骨素酶ABC-I蛋白表达量高、具有较高的酶活性,粗酶活性可达到5082 U/L。且稳定性好,37℃条件下的半衰期为11 h,4℃下的半衰期有28天。对提升我国ChSase AC的生物表达的技术水平具有重要的科学意义。
一种披发糖多孢菌来源的可降解生物胺的含铜胺氧化酶及其应用
本发明公开了一种披发糖多孢菌来源的可降解生物胺的含铜胺氧化酶及其应用,属于分子生物学技术领域。本发明从披发糖多孢菌中筛选获得了含铜胺氧化酶,该酶具有较强的降解生物胺的性能,降解谱广,并对乙醇有一定的耐受能力,对市售黄酒和市售酱油的总生物胺降解率分别为30.25%和18.29%,在黄酒、葡萄酒等发酵酒中具有一定的应用价值,有助于使发酵食品的安全性得到进一步提高。
一种醛醇氧化酶二聚体及其制备方法
本发明公开一种醛醇氧化酶二聚体及其制备方法,本发明通过基因融合的方式,将SpyTag、p53dim结构域、醛醇氧化酶以及SpyCatcher进行融合表达,得到了醛醇氧化酶二聚体,醛醇氧化酶二聚体显著提高了对甘油的氧化能力,而且对其它糖醇类底物的催化效率普遍提升了10~24倍。