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能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc-145细胞株的筛选方法
本发明公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc-145细胞株的筛选方法,属于生物工程技术领域。本发明提供的方法包括利用间接免疫荧光法检测由候选Marc-145单克隆细胞株繁殖形成的Marc-145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc-145细胞群的百分比,再根据该百分比筛选出能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc-145细胞株,具有快速、方便、客观、准确的优势,还能够基于此预测由Marc-145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量,可以指导疫苗生产。
基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法
一种基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法,通过克隆出包含如Seq ID No.1所示的绿色荧光蛋白基因的载体pUC57-GFP后,将其与pET-30a载体序列重组得到重组质粒pET-GFP,进一步与如Seq ID No.5所示的glu1基因序列重组得到重组质粒pET-glu1-GFP,再基于重组质粒构建pET-glu1-GFP原核表达菌株,经培养得到用于定位真菌免疫调节蛋白细胞的glu1-GFP重组蛋白。本发明利用绿色荧光蛋白对真菌免疫调节蛋白进行细胞定位,能够准确、快速的鉴定出蛋白质是否进入细胞,为真菌免疫调节蛋白生物活性的探索提供了更加广阔的前景。
一种基于纳米金聚集的卡那霉素均相生物传感方法及其应用
一种基于纳米金聚集的卡那霉素均相生物传感方法及其应用,通过卡那霉素核酸适配体与Mg~(2+)核酸酶链的DNA杂交反应抑制核酸酶活性,利用目标分析物卡那霉素Kana与其核酸适配体的特异性结合释放Mg~(2+)核酸酶链;再引入探针Au NP/H1和Au NP/H2,利用Mg~(2+)激活其核酸酶催化剪切作用来实现Mg~(2+)核酸酶的1/2劈开碱基序列和G-四链体1/2碱基序列的释放;通过G-四链体1/2碱基序列自身的折叠引起金纳米粒子的聚集反应,Mg~(2+)核酸酶的1/2劈开碱基序列自组装引起催化循环信号放大,构建吸光度与卡那霉素浓度之间的定量关系;本发明操作方便,成本低廉,灵敏度高,重复性和稳定性好,具有很好的应用价值。
一种检测猪圆环病毒不同型别的三重荧光定量PCR引物组、试剂盒及应用
本发明提供了一种检测猪圆环病毒不同型别的三重荧光定量PCR引物组、试剂盒及应用,涉及生物检测技术领域。本发明根据Genbank中猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4型的保守序列合成引物和探针,同时还构建了试剂盒,并用于猪疫病检测。本发明利用建立的荧光定量PCR体系对来自浙江省内83份猪组织样品进行检测,结果显示所述引物组特异性良好,重复性和稳定性俱佳,并且具有较高的一致性,准确率较高。在本发明中,PCV2、PCV3最低检测值均为10拷贝/μl,而PCV4最低检测值为1拷贝/μl,克服了当前猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4三重PCR检测方法敏感性低,易污染实验室等缺点。
同时检测辣椒三种RNA病毒的多重RT-PCR引物组及其方法
本发明公开了一种同时检测辣椒三种RNA病毒的多重RT-PCR引物组,引物对TMGMV-F和TMGMV-R为检测烟草轻型绿花叶病毒的引物,引物对CFEV1-F和CFEV1-R为检测小米椒内源RNA病毒1的引物,引物对PCV2-F和PCV2-R为检测辣椒潜隐病毒2的引物;本发明还公开了使用该多重RT-PCR引物组检测辣椒三种RNA病毒的方法,通过一次RT-PCR反应来检测植株是否感染上述三种病毒。本发明用三重RT-PCR检测三种辣椒病毒即烟草轻型绿花叶病毒、小米椒内源RNA病毒1和辣椒潜隐病毒2,与目前单重RT-PCR和双重RT-PCR检测方法相比,用一次RT-PCR反应可检测三种病毒,检测的病毒种类增多,检测效率进一步提高,检测的成本显著降低。
检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用
本发明公开了一种检测1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)、3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)的引物,并建立检测方法和制备检测试剂盒。本申请试剂盒方法简单、结果准确、灵敏度高,DHAV-3核酸的检测极限为10pg,DTMUV核酸的检测极限为10pg,DHAV-1核酸的检测极限为100pg,克服了多重引物互相干扰的问题,在临床检测中检测结果稳定。
一种反转录多重套式PCR检测引物
本发明属于基因型检测技术领域,公开了一种反转录多重套式PCR检测引物,引物包括两条外引物和三条内引物,外引物扩增YHV-1和YHV-8的目的基因,产生目的条带;三条内引物搭配分别特异性的扩增YHV-1和YHV-8,产生两种目的条带。本发明可灵敏的检测黄头病毒的致病基因型YHV-1和YHV-8,并通过产物大小鉴别两种基因型,用于制备上述病毒的鉴别、检测、监测等所需的反转录多重套式PCR的试剂或试剂盒,为该病毒的临床检测和流行病学研究提供了简便、可靠的技术支持。
用于检测多种HPV分型探针
本发明提供了用于检测多种HPV分型探针,包括底座,固定于所述底座顶端的伸缩式储液管,固定于所述伸缩式储液管顶端的负压吸斗,以及插接于所述负压吸斗顶端的引流探针,所述伸缩式储液管包括固定于所述底座顶端表面的静储纳管,以及插接于所述静储纳管顶端的动储纳管,所述静储纳管和动储纳管的一侧表面开设有开口,所述负压吸斗包括固定于所述动储纳管顶端的负压斗,以及插接与所述负压斗顶端且供所述引流探针穿插的密封盖,所述密封盖的顶端设有锁紧机构,所述密封盖与负压斗之间设有振动机构。本发明能够自动对用于检测的溶液进行汲取,并防止溶液飞溅,从而提高了汲取效率,并通过振动,使得储液针上的液滴甩落。
基于CRISPR/Cas12a技术快速检测新冠病毒和突变株的方法及试剂盒
本发明公开一种基于CRISPR/Cas12a技术快速检测新冠病毒和突变株的方法及试剂盒,属于生物技术领域。本发明通过LbaCas12/crRNA系统的单碱基分辨率能力,通过分别设计针对新冠病毒的非突变的靶点N501和突变靶点Y501的501-crRNA-W以及501-crRNA-M,对样品分子进行检测,只需要一台PCR仪或者恒温装置和简易荧光读取装置,当使用两个crRNA同时检测同一个样品的时候,可快速、有效区分待测核酸样品是非突变株还是突变株,同时具有高特异性、高灵敏度以及低成本的特点,更加广泛适用于各种分子诊断实验室。本发明对新冠病毒疫情防控具有重要意义。
基于KASP技术开发的不结球白菜核心SNP分子标记集及其应用
本发明属于分子生物学及植物分子育种技术领域,具体涉及基于KASP技术开发的不结球白菜核心SNP分子标记集及其应用,为开发一种快速、准确、有效的不结球白菜种质和品种鉴定评价方法,本发明基于KASP技术开发了不结球白菜的核心SNP分子标记集,该SNP分子标记集能够快速、准确、有效地鉴定评价种质资源材料或者育成品种,可以解决因大量种质积累而带来的资源冗余、保存管理不便以及知识产权纠纷等问题,为遗传图谱构建、基因定位、分子辅助育种等提供分子标记。