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一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法
本发明涉及基因编辑领域,具体涉及一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法。所述载体系统包括CD163基因敲除载体和MSTN基因敲除载体,所述CD163基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO:1;所述MSTN基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO:2。本发明载体系统和方法具有降低基因操作难度、提高敲除效率,在短时间内快速将CD163基因和MSTN基因敲除的优点。本发明方案无需药物筛选,不带有外源筛选标记,具有较为简便的细胞筛选流程。可以一次性获得双基因缺失的细胞系,大大缩短了双/多基因编辑动物的制备流程。
SLC26A4基因突变体及其应用
本发明提供了一种SLC26A4基因突变体及其应用。提供了一种基因突变,与野生型SLC26A4基因相比,具有c.128delG突变和/或c.1001+5G>C突变。该基因突变是可检测的,通过检测该基因突变在生物样品中是否存在,可以有效地检测生物样品是否患非综合征型耳聋。通过检测该基因突变,扩展和完善了遗传性听力损失疾病的检测和研究,为该疾病的诊断或治疗提供了新的检测位点以及新的检测方法和途径。
一种靶向casc5基因的sgRNA及其应用
本发明提供了一种靶向casc5基因的sgRNA及其应用,所述靶向casc5基因的sgRNA包括SEQ ID No.1所示的核酸序列。本发明还提供了一种casc5基因编辑系统、一种重组细胞及其构建方法和一种小头症动物模型的构建方法,通过基因编辑及筛选,得到的敲除了casc5基因的突变纯合子斑马鱼具有典型的头部较小、发育迟缓的表型,与人类的casc5基因缺失导致的小头症疾病的症状吻合,并且在mRNA水平上检测不到casc5基因的表达,可以应用于小头症药物筛选及相关的研究中,应用价值极其广泛。
非同源双链寡聚核苷酸片段在基因敲除系统中的应用
本发明涉及非同源双链寡聚核苷酸片段在基因敲除系统中的应用。基于现有基因敲除系统的靶基因敲除效率不高,且脱靶位点难以准确定位,本发明首次将非同源双链寡聚核苷酸片段与基因敲除系统相结合用于基因敲除,非同源双链寡聚核苷酸片段能够激发细胞的非同源末端连接修复,引入更多插入或缺失,同时非同源双链寡聚核苷酸片段可插入切割断点处,可作为标记物监测脱靶位点,有助于增强靶基因的敲除效率的同时准确监测脱靶效应。
一种lncRNA分子及其用途
本发明涉及一种lncRNA分子及其用途。本发明在耐紫杉醇的卵巢癌细胞中鉴定出lncRNA(TCONS-00013523)新的转录本全长序列,并命名为PRALR-α,进一步构建敲除和过表达PRALR-α的细胞系,发现敲除和过表达PRALR-α分别能增加和降低卵巢癌细胞对紫杉醇(PTX)的敏感性,说明PRALR-α和卵巢癌细胞紫杉醇耐药密切相关。通过该研究可为卵巢癌紫杉醇化疗的治疗提供新的思路和方法,合成针对PRALR-α特异性靶点的分子靶向药物;还可利用PRALR-α过表达载体或细胞系筛选治疗紫杉醇耐药卵巢癌的候选药物;同时有助于深入研究卵巢癌耐药性产生的分子机制。
PLPP1在利用CAR-T技术防治实体瘤中的应用
本申请属于肿瘤防治技术领域,具体涉及磷脂磷酸酶PLPP1在利用CAR-T技术防治实体瘤中的应用专利申请事宜。利用CAR-T技术防治实体瘤时,PLPP1用于增强T细胞分泌杀伤因子能力,同时用于增强T细胞的增殖能力。本申请中,通过比对外周血中激活的T细胞和肿瘤组织中激活的T细胞的差异,初步认为肿瘤微环境中T细胞脂质代谢异常,而PLPP1分子是造成这些异常的主要原因。基于此研究,发明人选择实体肿瘤靶点的MSLN-CAR为模型,以研究PLPP1对CAR-T功能的影响,初步结果表明,利用PLPP1改造后,可明显增强CAR-T细胞在肿瘤微环境中的功能及增殖能力,进而可为相关疾病的防控奠定良好的技术基础。
ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用
本发明公开了ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用,属于医药技术领域。本发明经过研究发现,ETV4基因可以用于重编程增生性瘢痕成纤维细胞,既开拓了ETV4基因新的应用领域,也开拓了新的重编程增生性瘢痕成纤维细胞的基因,具有积极的药学价值和广泛的社会意义。
一种人源诱导肝向分化干细胞的制备方法及其应用
本发明公开了一种人源诱导肝向分化干细胞的制备方法及其应用,所述方法包括将人源诱导多能干细胞(human induced pleuripotent stem cell,hiPSC)接种在matrigel包被的六孔细胞培养皿上,用mTeSR~(TM)1干细胞培养液进行培养。待干细胞生长克隆明显时,向干细胞培养液中加入激活素A(activin A)处理所述人iPS干细胞进行内胚层的诱导分化,得到内胚层细胞;然后将所述内胚层细胞在含有骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein-4,BMP-4)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)的RPMI+B-(27)培养基中培养,使得所述内胚层细胞定向分化,得到肝向分化干细胞。干细胞肝向分化移植方法减少肝向分化时间,增强干细胞在α-1抗胰蛋白酶缺乏症转基因小鼠肝脏体内的再生能力和成熟度,减少费用,该技术在临床应用具有广阔的前景。
一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法
本发明公开了一种提高抗体半乳糖基化水平的细胞培养方法,该方法以CHO细胞为表达系统,通过在细胞培养过程中添加半乳糖、尿嘧啶核苷和四水氯化锰后能有效提高抗体半乳糖基化水平,并且可以提高抗体的活性。
一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型
本发明公开了一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型。其制备方法为:1)构建含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体;2)利用步骤1)所述的含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体,制备含有KGF基因启动子的慢病毒溶液,并进一步感染间充质干细胞,筛选稳转株。本发明使用对疾病具有治疗作用的间充质干细胞为模型,以编码间充质干细胞分泌的可溶性因子的KGF基因的启动子为靶点,筛选促进间充质干细胞分泌可溶性因子KGF的潜在药物,为使用药物与间充质干细胞联合治疗急性肺损伤,增强疗效,奠定了基础。