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最新技术
一种单碱基突变方法及采用的系统
本发明涉及一种单碱基突变方法及采用的系统,针对欲突变基因的点突变位点设计sgRNA并构建CRISPR/Cpf1质粒;截取欲突变成基因的突变点附近的碱基序列,并在碱基序列中引入无义突变合成donor1;将CRISPR/Cpf1质粒和donor1共转染含有欲突变基因的细胞得到含有无义突变的细胞;针对含有无义突变的细胞中的含有无义突变的序列的点突变位点设计Re-sgRNA并构建Re-CRISPR/Cpf1质粒;截取欲突变成基因的突变点附近的碱基序列合成donor2;将Re-CRISPR/Cpf1质粒和donor2共转染含有无义突变的细胞得到含有欲突变成基因的细胞。本发明能够达到无痕修复的目的。
一种基于TALE组装的线粒体DNA编辑系统
本发明属于基因编辑技术领域,公开了一种基于TALE组装的线粒体DNA编辑系统。该编辑系统,包括RVD文库、线粒体定位骨架载体、细胞核定位骨架载体,RVD文库包含至少192个RVD模块,包括:160个双RVD模块、16个单RVD模块及16个半RVD模块。该编辑系统可显著提高TALE模块组装效率,显著降低TALE模块组装成本和时间;该发明使用的组装方法操作简单,适合推广应用;通过该方法可快速高效实现线粒体DNA编辑,并用于制作各种动物模型,以模拟人类线粒体DNA突变导致的疾病;可潜在应用于线粒体DNA突变疾病基因治疗。
一种指示心肌细胞自噬或自噬流的转基因斑马鱼模型的构建方法和应用
本发明涉及一种指示心肌细胞自噬或自噬流的转基因斑马鱼模型的构建方法和应用,通过构建可用于活体检测心肌细胞自噬以及自噬流的转基因斑马鱼模型,并建立相关药物处理后对心肌细胞自噬水平以及自噬流变化的检测方法。该方法不仅可以快速检测各类药物对调节心肌细胞自噬的作用,还可用于心肌细胞自噬相关药物的筛选、自噬在心脏各类疾病中的作用以及不同分子通路在心肌细胞自噬调节中的机制研究等。
一种C端带有表位标签M的表达载体及其构建方法与应用
本发明提供了一种C端带有表位标签M的表达载体及其构建方法与应用,首先构建C端带有表位标签M的真核表达载体;将所述C端融合有所述表位标签的真核表达载体与编码目标蛋白的核苷酸序列进行重组,获得重组表达载体;将所述重组表达载体在所述真核生物中进行表达;以M作为标签进行蛋白免疫印迹实验、或/和免疫沉淀实验或/和、免疫荧光实验或/和流式细胞术实验;本发明构建的表达载体pQFC-M,pQFC-M-3,通过蛋白免疫印迹检测发现,M标签序列能够被特异性识别来表征融合蛋白的表达。构建的带有M标签的表达载体为哺乳动物蛋白表达领域提供了一种新型的通用融合标签载体资源,丰富了国内的表位标签资源。
乳腺癌和卵巢癌疫苗
本文所述的组合物包含可在给予后在对象中引发免疫应答的肽的表位。所述组合物可包含核酸。所述组合物可包含肽。本文所述的方法包括向有此需要的对象给予包含肽的表位的组合物。
一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法
本发明涉及基因编辑领域,具体涉及一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法。所述载体系统包括CD163基因敲除载体和MSTN基因敲除载体,所述CD163基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO:1;所述MSTN基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO:2。本发明载体系统和方法具有降低基因操作难度、提高敲除效率,在短时间内快速将CD163基因和MSTN基因敲除的优点。本发明方案无需药物筛选,不带有外源筛选标记,具有较为简便的细胞筛选流程。可以一次性获得双基因缺失的细胞系,大大缩短了双/多基因编辑动物的制备流程。
一种猪BRS3基因CDs序列全长分段克隆的方法
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种猪BRS3基因CDs序列全长分段克隆的方法,本发明将BRS3基因进行分段,通过分段克隆和基因拼接法获得猪BRS3基因序列,弥补了BRS3基因在猪上研究的空白。本发明又通过以克隆的各片段混合DNA为模板,成功扩增获得猪BRS3全长CDs序列片段,并构建到克隆载体上,为BRS3基因的过表达和干扰序列筛选等以BRS3基因CDs序列为基础的研究与应用提供一种有效的方法。
SLC26A4基因突变体及其应用
本发明提供了一种SLC26A4基因突变体及其应用。提供了一种基因突变,与野生型SLC26A4基因相比,具有c.128delG突变和/或c.1001+5G>C突变。该基因突变是可检测的,通过检测该基因突变在生物样品中是否存在,可以有效地检测生物样品是否患非综合征型耳聋。通过检测该基因突变,扩展和完善了遗传性听力损失疾病的检测和研究,为该疾病的诊断或治疗提供了新的检测位点以及新的检测方法和途径。
一种靶向casc5基因的sgRNA及其应用
本发明提供了一种靶向casc5基因的sgRNA及其应用,所述靶向casc5基因的sgRNA包括SEQ ID No.1所示的核酸序列。本发明还提供了一种casc5基因编辑系统、一种重组细胞及其构建方法和一种小头症动物模型的构建方法,通过基因编辑及筛选,得到的敲除了casc5基因的突变纯合子斑马鱼具有典型的头部较小、发育迟缓的表型,与人类的casc5基因缺失导致的小头症疾病的症状吻合,并且在mRNA水平上检测不到casc5基因的表达,可以应用于小头症药物筛选及相关的研究中,应用价值极其广泛。
非同源双链寡聚核苷酸片段在基因敲除系统中的应用
本发明涉及非同源双链寡聚核苷酸片段在基因敲除系统中的应用。基于现有基因敲除系统的靶基因敲除效率不高,且脱靶位点难以准确定位,本发明首次将非同源双链寡聚核苷酸片段与基因敲除系统相结合用于基因敲除,非同源双链寡聚核苷酸片段能够激发细胞的非同源末端连接修复,引入更多插入或缺失,同时非同源双链寡聚核苷酸片段可插入切割断点处,可作为标记物监测脱靶位点,有助于增强靶基因的敲除效率的同时准确监测脱靶效应。