本发明涉及生物干细胞培养技术领域,特别是涉及一种脂肪源性干细胞的培养方法,包括:将脂肪块与消化液震荡消化,吸取上层脂肪细胞液加入培养基中密封离心,再加入培养基吹打细胞,即得脂肪源性干细胞悬液;滴加培养基使得培养瓶的顶部润湿,将脂肪源性干细胞悬液接种至已润湿的培养瓶的顶部,晃动培养瓶使得脂肪源性干细胞悬液与培养瓶的顶部接触,将培养瓶翻转180°,使得脂肪源性干细胞悬液铺到培养瓶的底面,恒温培养,即可。本发明解决了现有技术中组织贴壁法中由于脂肪油滴阻碍细胞贴壁从而导致细胞贴壁率低和细胞提取效率低的问题,利用培养瓶亲油的特性,通过预先在顶部吸附脂肪油滴,提高细胞贴壁率和细胞提取效率。