一株可干预代谢综合征的罗伊氏乳杆菌ccfm1178及应用
技术领域
本发明涉及一株可干预代谢综合征的罗伊氏乳杆菌CCFM1178及应用，属于微生物
技术领域
。背景技术
代谢综合征(metabolic syndrome，MS)是一组以中心性肥胖、高血糖病(糖尿病或糖调节受损)、血脂异常(包括高TG和/或低HDL-C血症)以及高血压等表现同时存在，以糖代谢、脂代谢异常为病理改变基础的多种危险因素聚集，促发II型糖尿病和动脉粥样硬化等各种心脑血管疾病发生发展的临床综合征。近年来，随着我国经济社会水平的不断发展，大众的生活水平不断提高，饮食结构中碳水化合物、油脂的比重日益增加，而诸多工作条件的限制，让人们有久坐不动的习惯。这些外部环境因素结合自身的遗传因素共同导致了我国人群代谢综合征患病率的大幅提高。据研究表明，全国约有7700万名代谢综合征患者，即每8个成年人中就有1人患有代谢综合征。在我国超过60岁的老年人代谢综合征的患病率为25％，且随年龄增长患病率也逐渐升高。因此，寻求一种合适的缓解代谢综合征的手段是十分必要的。
目前针对代谢综合征采用的治疗措施主要是加强运动改善饮食并结合药物治疗，目标均为控制并改善代谢综合征的各项危险因素，主要包括降低体重的药物如奥利司他、氯卡色林；减轻胰岛素抵抗的如二甲双胍、噻唑烷二酮类(罗格列酮、吡格列酮等)；降低血脂的贝特类药物如非诺贝特，及降胆固醇的他汀类药物如辛伐他汀等；降血压的血管紧张素转换酶抑制剂类药物如卡托普利等。这些药物针对代谢综合征的各项单一风险因素具有良好的疗效，但是，长期服用药物存在一定的副作用，如长期服用二甲双胍会引起刺激一些患者的胃肠道造成不适并且可能会影响患者对维生素B12的吸收，罗格列酮会引起肝功能损伤及水肿等。
有大量研究报道，肠道菌群对人体的生理代谢起着极为重要的作用，肠道菌群结构失调和多种疾病相关，包括胃肠疾病(肠易激综合征和炎症性肠病等)、代谢性疾病(肥胖、高血脂和糖尿病等)。代谢综合征的发生与肠道菌群失调也具有密切关系，常用的肠道菌群调节制剂有益生菌和益生元等。益生菌是可食用的对人体健康有益的微生物，具有潜在的缓解血糖、血脂代谢异常、调节肠道菌群结构及脑肠轴的功能。如CN107699517A公开了一株青春双歧杆菌及其用途，可以显著改善高脂饮食导致的代谢综合征小鼠肝脏、十二指肠的病理损伤以及血清中甘油三酯和总胆固醇含量升高和口服糖耐量升高；CN107523526A公开了一种罗伊氏乳杆菌及其用途，可以降低代谢综合征小鼠血清脂质及血糖水平；CN105567586A则公开了一株具有抗糖尿病功能的植物乳杆菌NCU116，该菌株可通过调节机体血糖、血脂、激素水平及调节机体内代谢途径来达到抗糖尿病的作用。但以上专利均是使用益生菌来缓解代谢综合征，而目前对益生菌如何抑制内毒素和保护结肠肠道屏障方面益生菌少有研究。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CCFM1178，已于2021年03月19日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.61574，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明所述的罗伊氏乳杆菌CCFM1178具有下述生物学特征：
(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细长杆状，无鞭毛，无芽孢；
(2)菌落特征：培养36小时形成明显凸起菌落，边缘不整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑，不产生色素；
(3)生长特性：在37℃恒温的条件下，在MRS培养基中培养约18小时达到稳定期；
(4)药用安全性：对C57BL/6J小鼠无毒副作用。
本发明的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CCFM1178可缓解代谢综合征、调节肠道菌群、缓解肠易激综合征，具体体现在：
(1)降低代谢综合征个体体重，改善高脂饮食导致体重过度增加；
(2)降低代谢综合征个体空腹血糖水平，改善代谢综合征个体胰岛素抵抗指数；
(3)降低高脂饮食诱导代谢综合征个体的血清总胆固醇；
(4)恢复由高脂导致的代谢综合征个体肠道菌群异常；
(5)代谢综合征个体血清低密度脂蛋白；
(6)降低代谢综合征个体体脂和附睾脂肪指数；
(7)对于细菌脂多糖内毒素诱导炎症具有积极作用；
(8)有助于维持结肠屏障结构。
本发明的第二个目的是提供所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178在制备药物中的应用。
在一种实施方式中，所述药物具有如下至少一种功能：
(a)缓解代谢综合征；
(b)调节肠道菌群；
(c)缓解肠易激综合征；
(d)缓解肝组织的炎症和肝组织纤维化。
在一种实施方式中，所述代谢综合征表现的症状包括高血糖、高血脂和/或肝脏氧化应激。
在一种实施方式中，所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178在药物中的含量≥1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
在一种实施方式中，所述药物还含有药学上可接受的辅料。
在一种实施方式中，所述药学上可接受的辅料包括填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或多种。
在一种实施方式中，所述药物的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明的第三个目的是提供含有所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178的组合物。
在一种实施方式中，所述组合物为微生物制剂，含有所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178的湿细胞或冻干后的细胞。
在一种实施方式中，所述微生物制剂中罗伊氏乳杆菌CCFM1178的活菌数≥1×106CFU/g。
在一种实施方式中，所述微生物制剂的制备方法为：将罗伊氏乳杆菌CCFM1178接种到MRS培养基中，37℃厌氧条件下培养18-20h，收集菌体，用保护剂重悬菌体细胞，使菌浓度达到1×1010CFU/ml，然后悬浮液在37℃厌氧条件下培养50-70min，干燥。
在一种实施方式中，每升所述MRS培养基含有：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、吐温801ml、一水合硫酸锰0.25g。
在一种实施方式中，所述保护剂含有脱脂奶粉、麦芽糊精、海藻糖。
在一种实施方式中，所述保护剂含有：100g/L-150g/L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖。
在一种实施方式中，将收集的菌体用磷酸盐缓冲液清洗2-4次，所述磷酸盐缓冲液pH为6.8-7.2。
在一种实施方式中，所述干燥可以采用任意一种菌液干燥工艺进行干燥，包括但不限于真空冷冻干燥。
在一种实施方式中，所述真空冷冻干燥是在-15～-20℃预冻8-14h后进行真空冷冻干燥。
在一种实施方式中，所述组合物为功能性食品或保健品。
在一种实施方式中，所述组合物为发酵食品，所述发酵食品为使用罗伊氏乳杆菌CCFM1178发酵生产制得的，包括固态食品、液态食品、半固态食品。
在一种实施方式中，所述发酵食品包括乳制品、豆制品或果蔬制品；所述乳制品包括牛奶、酸奶油或奶酪；所述果蔬制品的原料包括黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜制品。
本发明还要求保护所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178在制备食品或保健品中的应用。
本发明有益效果和优点如下：
本发明所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178具有改善代谢综合征的功效；具体地，所述改善代谢综合征包括：降低代谢综合征个体体重、降低代谢综合征个体空腹血糖水平、降低代谢综合征个体葡萄糖耐受性、降低高脂饮食诱导代谢综合征小鼠血清总胆固醇、降低代谢综合征个体血清低密度脂蛋白，降低代谢综合征个体体脂、和/或降低代谢综合征个体的附睾脂肪指数以及增加棕色脂肪指数；恢复由高脂导致的小鼠肠道菌群失衡；可恢复高脂饮食诱导代谢综合征小鼠粪便内菌群的丰度的异常，并且对于细菌脂多糖内毒素诱导炎症具有积极作用，维持结肠屏障结构具有较好的效果。本发明所述的罗伊氏乳杆菌CCFM1178可用于制备缓解代谢综合征，调节肠道菌群缓解肠易激综合征的保健食品或药物，具有非常广泛的应用前景。
生物材料保藏
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，分类命名为Lactobacillus reuteri，已与2021年3月19日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No.61574。
附图说明
图1示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠肠道内菌群的影响；
图2示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠体重增加百分比、附睾脂肪指数和棕色脂肪指数的影响；
图3示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠每日饮食摄入量和能量转化效率的影响；
图4示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠的血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响；
图5示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠的肝脏促炎因子IL-6和TNF-α的影响；
图6示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠的肝脏抗炎因子IL-10的影响；
图7示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠的血清脂多糖(LPS)内毒素的影响；
图8示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对代谢综合征小鼠的结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1基因的表达水平的影响；
(注：*p<0.05，**p<0.01)
具体实施方式
本发明所述罗伊氏乳杆菌CCFM1178具有下述生物学特性：
(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细长杆状，无鞭毛，无芽孢；
(2)菌落特征：培养36小时形成明显凸起菌落，边缘不整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑，不产生色素；
(3)生长特性：在37℃恒温的条件下，在MRS培养基中培养约18小时达到稳定期；
(4)对C57BL/6J小鼠无毒副作用；
(5)能够显著改善高脂饮食导致体重过度增加；
(6)能够显著调节高脂饮食小鼠肝脏的炎症水平；
(7)可显著恢复由高脂饮食导致的肠道内菌群的失调；
(8)降低食欲和饮食摄入效率；
(9)可调节血清中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，使其降低至正常水平；
(10)对于细菌脂多糖内毒素诱导炎症具有积极作用；
(11)维持结肠屏障结构具有较好的效果。
实施例1：罗伊氏乳杆菌CCFM1178的筛选和鉴定
(一)乳酸菌的分离筛选
(1)取1g来自云南省丽江市猪粪便。梯度稀释后涂布于乳杆菌高度选择固体培养基(每1L MRS培养基中含有0.02g万古霉素、20g琼脂，pH值为5.0±0.1)平板，置于37℃培养48-72小时。
(2)观察记录菌落形态，挑取菌落划线纯化。
(3)在MRS液体培养基中，37℃培养24小时，所得菌落进行革兰氏染色，记录菌落形态。
(4)弃除菌落中的革兰氏阴性菌菌株和革兰氏阳性球菌，挑选得到革兰氏阳性杆菌。
(5)过氧化氢酶分析后，弃除过氧化氢酶阳性菌株，保留过氧化氢酶阴性菌株。
(二)罗伊氏乳杆菌的分子生物学鉴定
(1)单菌基因组提取(按照TIANamp Bacteria DNA kit操作步骤进行)
A.将步骤(二)所筛选得到的乳酸菌培养过夜，取菌悬液1mL于1.5mL离心管，10，000rpm(～11,500×g)离心1min，尽量吸净上清；
B.向菌体沉淀中加入180μL缓冲液(20mM Tris，pH 8.0；2mM Na2-EDTA；1.2％Triton；终浓度为20mg/mL的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性)，37℃处理30min以上；
C.向管中加入20μL Proteinase K溶液，混匀；
D.加入220μL缓冲液GB，振荡15sec，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
E.加220μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
F.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12，000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
G.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
H.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中；重复操作一次；
I.将吸附柱CB3放回收集管中，12，000rpm(～13,400×g)离心2min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
J.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12，000rpm(～13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。
共筛选获得35株菌，经过16S rDNA扩增和序列比对，鉴定编号为CCFM1178的菌株为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。
实施例2：罗伊氏乳杆菌CCFM1178对模拟胃肠液的耐受性
将冷冻保存的罗伊氏乳杆菌CCFM1178划线接种于MRS固体培养基中(MRS培养基+0.05％半胱氨酸盐酸盐)，在温度37℃厌氧静置培养48h，再经MRS培养液传代培养2～3次后，取1ml罗伊氏乳杆菌CCFM1178的培养液，与9.0mL pH 2.5人工模拟胃液(含1％胃蛋白酶、pH＝2.5的MRS培养基)混合，并在37℃下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h和2h时取样，用MRS琼脂培养基浇注培养，再进行平板菌落计数，根据活菌数计算其存活率。存活率是在该培养液中取样时的活菌数与在第0h时活菌数之比，以％表示。
取1ml罗伊氏乳杆菌CCFM1178的培养液加入9.0mL pH 2.5人工模拟肠液(含0.3％牛胆盐、1％胰蛋白酶、pH＝8.0的MRS培养基)中，在37℃下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h和2h时取样，用MRS琼脂培养基浇注培养，再进行平板菌落计数，根据活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中取样时的活菌数与在第0h时活菌数之比，以％表示。实验结果如表1和表2所示。结果表明，罗伊氏乳杆菌CCFM1178对人工胃肠液具有较好的耐受性。
表1罗伊氏乳杆菌CCFM1178在人工模拟胃液中的耐受性
表2罗伊氏乳杆菌CCFM1178在人工模拟肠液中的耐受性
实施例3：罗伊氏乳杆菌CCFM1178对C57BL/6J小鼠的安全性验证
将罗伊氏乳杆菌CCFM1178菌体细胞重悬于生理盐水中，制成浓度为1×1010CFU/mL的菌悬液。取体重20g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠8只，适应环境一周后，每日给予该浓度菌悬液灌胃一次0.2ml，观察一周，记录死亡和体重情况。
结果列于表3中。喂食浓度1×1010CFU/mL的罗伊氏乳杆菌CCFM1178未对小鼠造成明显影响，小鼠体重无显著变化，小鼠外观无明显病理症状，无死亡现象产生。
表3小鼠体重的变化及死亡情况
注:-表示小鼠无死亡。
实施例4：罗伊氏乳杆菌CCFM1178对由高脂饲料导致的肠道菌群失调具有恢复作用
取体重20-21g的健康雄性C57BL/6J小鼠48只，适应环境1周，随机分为6组：空白对照组(NC)、高脂模型对照组(HFD)、辛伐他汀对照组(Simvastatin)、二甲双胍对照组(Metformin)、罗伊氏乳杆菌CCFM1178干预组(CCFM1178)、罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242干预组对照组(NCIMB 30242)，每组含小鼠8只；其中罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242为常用的商业化保健品菌株，辛伐他汀为降血脂的常用药物，二甲双胍为控制的2型糖尿病的常用药物。
分别培养罗伊氏乳杆菌CCFM1178和NCIMB 30242，将菌泥与保护剂(100g/L-150g/L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖)按1:2(w/v，即1g菌泥：2mL保护剂溶液)混合，在-15～-20℃预冻8-14h后进行真空冷冻干燥得到冻干菌粉，冻干菌粉重悬于生理盐水中，使罗伊氏乳杆菌在生理盐水菌悬液中的浓度为1×1010CFU/mL，用于小鼠灌胃，实验动物分组及处理方法见表4。
表4实验动物分组
试验期间定期监测小鼠体重。
试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃，提取粪便中的基因组DNA进行16s rDNA测序，并利用二代测序仪对肠道菌群结构进行分析。试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，辅以颈椎脱臼法处死。血液样本3000×g、4℃条件下离心15min，取上清，-80℃冻存用于测定相关血清指标。部分肝脏收集后迅速置于预冷的生理盐水中漂洗去血，放入多聚甲醛中固定，剩余部分肝脏于液氮中速冻并转移至-80℃冻存，后续制成肝匀浆以用于测定相关指标，具体制备方法如下：称取一定量肝脏组织，按1：9比例加入生理盐水进行组织研磨，3000r离心10min，取上清冻存于-80℃备用。
菌群分析实验结果如图1所示。与HFD组相比，罗伊氏乳杆菌CCFM1178的干预(CCFM1178组)可缓解由高脂饮食导致的小鼠肠道菌群内粪杆菌属、Acetatifactor、瘤胃球菌属、Eubacterium_coprostanoligenes_group、Clostridium_sensu_stricto_1、Romboutsia的肠道微生物的丰度异常。
实施例5：罗伊氏乳杆菌CCFM1178缓解代谢综合征小鼠体重增加百分比、附睾脂肪指数和棕色脂肪指数降低
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。称重计算体重增加百分比、附睾脂肪指数和棕色脂肪指数。
实验结果如图2所示。模型组小鼠体重显著升高，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178明显降低了小鼠的体重增加百分比和白色脂肪指数(白色脂肪/体重)，相对于模型组降低了19.38％和36.7％，增加了棕色脂肪指数(棕色脂肪/体重)，是模型组的1.65倍，也优于公开于CN112322527A的菌株CCFM1145(棕色脂肪指数0.0045)。其降低小鼠体重水平的能力显著高于两个药物组和罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242。
实施例6：罗伊氏乳杆菌CCFM1178降低代谢综合征小鼠每日饮食摄入量和能量效率
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4。称重计算饮食摄入量和能量效率。
实验结果如图3所示。模型组小鼠每日饮食摄入量和能量效率显著升高，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178明显降低了小鼠的每日饮食摄入和能量效率。其降低小鼠每日饮食摄入水平的能力稍高于药物辛伐他汀、二甲双胍和罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242，较这三组分别降低4.93％、5.01％和3.87％。
实施例7：罗伊氏乳杆菌CCFM1178降低代谢综合征小鼠血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4，试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血。血样于3000×g、4℃条件下离心15min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定血液中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。
实验结果如附图4所示。由图4可以看出，高脂饮食组小鼠血清总胆固醇含量明显升高至5.05mmol/L，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178可使血清总蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量降低至3.68mmol/L和0.71mmol/L，其对血清总胆固醇含量的恢复能力要显著强于对照药物及罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242，也优于公开于CN112322527A的菌株CCFM1145(TC3.78mmol/L，LDL-C 0.72mmol/L)，提示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对于血脂代谢具有积极作用。
实施例8：罗伊氏乳杆菌CCFM1178降低代谢综合征小鼠肝脏促炎因子IL-6和TNF-α的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4，试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，颈椎脱臼处死。取肝脏-80℃冻存，测定时称取一定量肝脏组织，按1：9比例加入生理盐水进行组织研磨，3000r离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定肝脏中促炎因子IL-6和TNF-α的含量。由于药物缓解代谢综合征的途径与微生物不同，本实施例未对药物组进行检测。
实验结果如附图5所示。由实验结果可以看出，与正常对照组相比，高脂饮食组小鼠肝脏中促炎因子IL-6和TNF-α含量显著升高，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178可降低肝脏中促炎因子IL-6和TNF-α含量至1173.36pg/mg protein和4862.37pg/mg protein，恢复到与空白组相当的水平，罗伊氏乳杆菌CCFM1178对肝脏促炎因子的干预能力显著强于对照及罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242。
实施例9：罗伊氏乳杆菌CCFM1178降低代谢综合征小鼠肝脏抗炎因子IL-10的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4，试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，颈椎脱臼处死。取肝脏-80℃冻存，测定时称取一定量肝脏组织，按1：9比例加入生理盐水进行组织研磨，3000r离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定肝脏中抗炎因子IL-10的含量。由于药物缓解代谢综合征的途径与微生物不同，本实施例未对药物组进行检测。
实验结果如附图6所示。由实验结果可以看出，与正常对照组相比，高脂饮食组小鼠肝脏抗炎因子IL-10含量显著升高至1169.76pg/mg protein，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178可升高肝脏抗炎因子IL-10的含量至1169.72U/mg protein，罗伊氏乳杆菌CCFM1178对预防代谢综合征水平显著强于对照药物及罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242。
实施例10:罗伊氏乳杆菌CCFM1178降低代谢综合征小鼠血清脂多糖(LPS)内毒素水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4，试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血。血样3000×g、4℃条件下离心15min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定血液中脂多糖(LPS)内毒素的含量。
实验结果如附图7所示。由图7可以看出，高脂饮食组小鼠血清LPS含量明显升高至348.7EU/L，灌胃罗伊氏乳杆菌CCFM1178可降低血清LPS的含量至123.2EU/L，其对血清LPS含量的恢复能力要显著强于对照药物及罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242，提示罗伊氏乳杆菌CCFM1178对于细菌脂多糖(LPS)内毒素诱导炎症具有积极作用。
实施例11:罗伊氏乳杆菌CCFM1178增加代谢综合征小鼠结肠组织中紧密连接蛋白表达水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例4，试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，颈椎脱臼处死。取小鼠结肠-80℃冻存，测定时称取一定量结肠组织，按1：9比例加入生理盐水进行组织研磨，3000r离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1基因的表达水平。
实验结果如附图8所示。罗伊氏乳杆菌CCFM1178干预组的ZO-1、Occludin和Claudin-1基因的表达水平都明显高于模型组，且分别使ZO-1、Occludin和Claudin-1基因的表达水平回升至0.912、0.976和1.121，接近于空白组；而罗伊氏乳杆菌NCIMB 30242干预组的ZO-1、Occludin和Claudin-1基因的表达水平和模型组没有显著差异，说明罗伊氏乳杆菌CCFM1178对于维持结肠屏障结构具有较好的效果。
实施例12：制备含罗伊氏乳杆菌CCFM1178的发酵剂
MRS培养基：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、吐温80 1ml、一水合硫酸锰0.25g，水定容至1000ml，调节pH至6.5，在119-123℃条件下灭菌15-25min。
保护剂：100g/L-150g/L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖。
将罗伊氏乳杆菌CCFM1178接种到MRS培养基中，37℃厌氧条件下培养18-20h，收集菌体，用保护剂重悬菌体细胞，使菌浓度达到1010CFU/ml，然后悬浮液在37℃厌氧条件下培养50-70min，干燥。
可选地，所述干燥是在-15～-20℃预冻8-14h后进行真空冷冻干燥。
实施例13：罗伊氏乳杆菌CCFM1178的应用
(1)利用罗伊氏乳杆菌CCFM1178制造乳杆菌乳饮料
将原料乳脱脂奶在95℃热杀菌20min，然后冷却至4℃，再加入实施例1筛选的罗伊氏乳杆菌CCFM1178或实施例12制备的发酵剂，使菌体浓度达到106CFU/mL以上，在4℃冷藏保存即得到含罗伊氏乳杆菌CCFM1178活菌的乳饮料。
(2)利用罗伊氏乳杆菌CCFM1178制造豆奶
采用软水浸泡大豆，水量为原大豆量三倍体积，在温度80℃下浸泡1～2h，再去除大豆皮。接着，沥去浸泡水，另加沸水磨浆，并在温度高于80℃的条件下保温10～15min。浆体用150目滤膜过滤后离心，得到的离心液即为粗豆奶，再将它加热到温度140～150℃，然后将热的粗豆奶迅速导入真空冷却室进行抽真空，所述粗豆奶中的异味物质随着水蒸汽迅速排出。经过真空脱气后，将其温度降至37℃左右，再接入实施例1筛选的罗伊氏乳杆菌CCFM1178或实施例12制备的发酵剂，使罗伊氏乳杆菌CCFM1178浓度达到106CFU/mL以上，在4℃冷藏保存即得到含罗伊氏乳杆菌CCFM1178活菌的豆奶。
(3)利用罗伊氏乳杆菌CCFM1178制造果蔬饮料
选用新鲜蔬菜(例如黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜中的一种或多种)洗净后榨汁，接着进行高温瞬间灭菌，在温度140℃下高温热杀菌2s后，立即降温到37℃左右，再接入本发明的罗伊氏乳杆菌CCFM1178发酵剂，使其浓度达到106CFU/mL以上，在4℃冷藏保存即得到含罗伊氏乳杆菌CCFM1178活菌的果蔬饮料。
(4)利用罗伊氏乳杆菌CCFM1178制胶囊制品
本发明的罗伊氏乳杆菌CCFM1178在MRS培养基上培养24h，在温度4℃与4000r/min的条件下离心20min，用PBS冲洗两次，再加入以最后得到含罗伊氏乳杆菌CCFM1178的粉剂重量计4％脱脂奶粉和6％乳糖混合10min，再加入无菌2％氯化钙和3％海藻酸钠，同时以150r/min搅拌10min，再静止固化30min，最后清洗过滤，得到的滤液进行冷冻干燥20h，得到含罗伊氏乳杆菌CCFM1178的粉剂，把这种粉剂装入商业化的药用微胶囊，得到所述的胶囊制品。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
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