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基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法
一种基于绿色荧光蛋白的真菌免疫调节蛋白细胞定位方法,通过克隆出包含如Seq ID No.1所示的绿色荧光蛋白基因的载体pUC57-GFP后,将其与pET-30a载体序列重组得到重组质粒pET-GFP,进一步与如Seq ID No.5所示的glu1基因序列重组得到重组质粒pET-glu1-GFP,再基于重组质粒构建pET-glu1-GFP原核表达菌株,经培养得到用于定位真菌免疫调节蛋白细胞的glu1-GFP重组蛋白。本发明利用绿色荧光蛋白对真菌免疫调节蛋白进行细胞定位,能够准确、快速的鉴定出蛋白质是否进入细胞,为真菌免疫调节蛋白生物活性的探索提供了更加广阔的前景。
一种指示心肌细胞自噬或自噬流的转基因斑马鱼模型的构建方法和应用
本发明涉及一种指示心肌细胞自噬或自噬流的转基因斑马鱼模型的构建方法和应用,通过构建可用于活体检测心肌细胞自噬以及自噬流的转基因斑马鱼模型,并建立相关药物处理后对心肌细胞自噬水平以及自噬流变化的检测方法。该方法不仅可以快速检测各类药物对调节心肌细胞自噬的作用,还可用于心肌细胞自噬相关药物的筛选、自噬在心脏各类疾病中的作用以及不同分子通路在心肌细胞自噬调节中的机制研究等。
一种C端带有表位标签M的表达载体及其构建方法与应用
本发明提供了一种C端带有表位标签M的表达载体及其构建方法与应用,首先构建C端带有表位标签M的真核表达载体;将所述C端融合有所述表位标签的真核表达载体与编码目标蛋白的核苷酸序列进行重组,获得重组表达载体;将所述重组表达载体在所述真核生物中进行表达;以M作为标签进行蛋白免疫印迹实验、或/和免疫沉淀实验或/和、免疫荧光实验或/和流式细胞术实验;本发明构建的表达载体pQFC-M,pQFC-M-3,通过蛋白免疫印迹检测发现,M标签序列能够被特异性识别来表征融合蛋白的表达。构建的带有M标签的表达载体为哺乳动物蛋白表达领域提供了一种新型的通用融合标签载体资源,丰富了国内的表位标签资源。
一种生物合成乙醇的构建体,菌株以及生产乙醇的方法
本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种生物合成乙醇的构建体,菌株以及生产乙醇的方法。本发明利用光强启动子Pcpc560驱动丙酮酸脱羧酶和NADPH依赖型醛还原酶yqhd基因在蓝细菌中一个和多个基因位点表达,利用分子技术首次对丙酮酸代谢反向的蓝藻内源途径进行敲除从而构建合成具有高乙醇产量的基因工程蓝藻。本发明首次成功地在集胞藻PCC6803中构建了一条高效合成生物乙醇的代谢途径,可提高乙醇合成前体丙酮酸含量,实现乙醇在集胞藻PCC6803体内的高效合成,具有良好的可行性。
一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型
本发明公开了一种靶向KGF启动子的间充质干细胞治疗急性肺损伤筛选模型。其制备方法为:1)构建含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体;2)利用步骤1)所述的含有KGF基因启动子的荧光素酶报告基因载体,制备含有KGF基因启动子的慢病毒溶液,并进一步感染间充质干细胞,筛选稳转株。本发明使用对疾病具有治疗作用的间充质干细胞为模型,以编码间充质干细胞分泌的可溶性因子的KGF基因的启动子为靶点,筛选促进间充质干细胞分泌可溶性因子KGF的潜在药物,为使用药物与间充质干细胞联合治疗急性肺损伤,增强疗效,奠定了基础。
基于lux报告系统的猪链球菌发光菌及其构建方法
本发明公开了基于lux报告系统的猪链球菌发光菌及其构建方法。本发明提供了一种猪链球菌发光菌,是将荧光素酶报告系统敲入片段定点插入到猪链球菌的基因组中SSU05-0518基因和SSU05-0519基因之间后得到的;所述荧光素酶报告系统敲入片段自5’端到3’端依次包含用于表达荧光素酶报告系统的基因簇luxAB和luxCDE的两个表达盒,以及用于表达抗性标记基因的表达盒。本发明通过设计7种猪链球菌发光菌的构建策略,优化筛选不同的启动子,最终建立了一种基于lux报告系统的猪链球菌发光菌的构建方法,可以在小鼠体内实时观察到细菌,在猪链球菌的感染途径及致病机制研究上具有一定的应用前景。
高效鉴定米曲霉CRISPR/Cas9突变体的方法
本发明提供了高效鉴定米曲霉CRISPR/Cas9突变体的方法,包括:1)构建基于AMA1自主复制质粒的米曲霉基因编辑系统;2)利用米曲霉曲酸合成基因评估步骤1)构建的米曲霉基因编辑系统,所述米曲霉曲酸合成基因选自kojA、kojR和kojT;3)将kojA的sgRNA和PAM序列置于DsRed的起始密码子后面,构建含有kojA的sgRNA和PAM序列的非功能性DsRed,以此评估非功能性DsRed作为报告基因用于筛选米曲霉CRISPR/Cas9突变体。本发明实现了从米曲霉CRISPR/Cas9突变株中批量的初步筛选突变体,避免了大量提取DNA的繁琐,无需进行批量的米曲霉转化子测序筛选。