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热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用
本发明涉及基因工程领域,具体涉及热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用。所述葡萄糖氧化酶突变体通过将氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的葡萄糖氧化酶的第4位、第70位、第86位、第96位、第274位、第508位中至少一个氨基酸进行取代获得。本发明提供葡萄糖氧化酶突变体,与野生型葡萄糖氧化酶相比,其热稳定性有了显著的提升,有利于该酶在工业化生产中应用。本发明对来源于黑曲霉的葡萄糖氧化酶进行分子改造,通过定点突变技术和易错PCR方法提高了葡萄糖氧化酶的热稳定性,为葡萄糖氧化酶的工业化应用奠定基础。
突变的米曲霉菌株
本发明涉及突变的米曲霉菌株。具体地,本发明涉及突变的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株,其相对于未突变的菌株,内源酶,例如淀粉酶和/或外源蛋白,如食品用脂肪酶,优选选自米黑根毛霉脂肪酶、棉状嗜热丝孢菌脂肪酶和尖孢镰刀菌脂肪酶的食品用脂肪酶的生产能力提高。本发明还涉及所述菌株的各种用途。
高效鉴定米曲霉CRISPR/Cas9突变体的方法
本发明提供了高效鉴定米曲霉CRISPR/Cas9突变体的方法,包括:1)构建基于AMA1自主复制质粒的米曲霉基因编辑系统;2)利用米曲霉曲酸合成基因评估步骤1)构建的米曲霉基因编辑系统,所述米曲霉曲酸合成基因选自kojA、kojR和kojT;3)将kojA的sgRNA和PAM序列置于DsRed的起始密码子后面,构建含有kojA的sgRNA和PAM序列的非功能性DsRed,以此评估非功能性DsRed作为报告基因用于筛选米曲霉CRISPR/Cas9突变体。本发明实现了从米曲霉CRISPR/Cas9突变株中批量的初步筛选突变体,避免了大量提取DNA的繁琐,无需进行批量的米曲霉转化子测序筛选。
一类5-12-5三环二倍半萜骨架化合物及其制备
本发明提供了一类5-12-5三环二倍半萜骨架化合物及其制备,Schultriene的结构式如下所示,其合成酶CcCS的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,合成基因为从CS12565菌株(Cytospora schulzeri 12565)基因组中克隆得到,多核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。CcCS蛋白具有催化底物链长延伸和结构环化的功能,能够辅助Schultriene类化合物母核合成。本发明发现的CcCS基因催化产生新的二倍半萜骨架化合物,为丰富天然产物化合物库、发现新抗生素提供了宝贵的先导化合物资源。