本发明公开了胆管癌胆汁外泌体的提取方法,包括步骤一:标本的采集;步骤二:外泌体的提取:离心前一天,胆汁标本从冰箱取出置于4度冰箱融化,得到50ml黄色胆汁;胆汁以4°、300g、5min离心1次,然后取上清液;上清以4°、2000g、10min离心1次,然后取上清;得到的50mL上清液稀释至60mL,以4°、12500g、离心30min,离心结束后取上清液;得到的胆汁上清液稀释至70mL,过0.22um筛子后,以4°、120000g、离心2h,得到底部沉淀,将该沉淀用无菌D-PBS反复吹打溶解后转移至EP管中,共得到200uL外泌体悬液,NTA检测后置于-80°冰箱中保存;步骤三:外泌体的鉴定。通过标本的采集、外泌体的提取、外泌体的鉴定,进而能够实现对胆管癌胆汁外泌体的提取,在临床诊疗中有巨大的潜在应用价值。