本发明公开了一种蜡梅原生质体的制备方法,该方法包含:在黑暗条件下培养蜡梅的花药,诱导产生愈伤组织;将愈伤组织置于酶解溶液中,在振荡培养箱中黑暗培养,得到含原生质体的酶解液;其中,酶解溶液包含:纤维素酶和离析酶;在酶解液中加入适量W5溶液稀释,用细胞过滤器过滤;其中,W5溶液为氯化钠、氯化钙、氯化钾、2-(N-吗啉基)乙磺酸和水的混合液;将所得滤液离心,弃上清液,以获得含蜡梅原生质体的溶液。本发明的方法以蜡梅愈伤组织为材料制备原生质体,使用纤维素酶和离析酶酶解液组合,不受取材时间、数量的影响,酶解可得到平均1.11×10~6个/g的蜡梅原生质体产量,高效快速。