具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行进一步的阐述。

实施例1：

一种基于靶向测序的枸杞S基因的鉴定方法，包括如下步骤：本实施例选择8份枸杞样本进行试验，8份枸杞样本分别为：Ly99-01、Ly100-01、Ly101-01、Ly102-01、Ly103-01、Ly105、Ly106、Ly107；

步骤1、收集已知枸杞品种的S基因，作为参考枸杞品种的S基因，并依据参考枸杞品种的S基因序列，进行探针设计

步骤1.1、收集已知枸杞品种的S基因，作为参考枸杞品种的S基因，本实施例参考枸杞品种为15个，将这15个参考枸杞品种的S基因的DNA序列，作为转录本序列；所述15个参考枸杞品种及其S基因序列为：枸杞ID:1，其序列如SEQIDNO:1所示；枸杞ID:11，其序列如SEQIDNO:2所示；枸杞ID:12-1，其序列如SEQIDNO:3所示；枸杞ID:12-2，其序列如SEQIDNO:4所示；枸杞ID:2，其序列如SEQIDNO:5所示；枸杞ID:3，其序列如SEQIDNO:6所示；枸杞ID:4，其序列如SEQIDNO:7所示；枸杞ID:5，其序列如SEQIDNO:8所示；枸杞ID:6，其序列如SEQIDNO:9所示；枸杞ID:7，其序列如SEQIDNO:10所示；枸杞ID:HM195023，其序列如SEQIDNO:11所示；枸杞ID:HM195027，其序列如SEQIDNO:12所示；枸杞ID:HM195029，其序列如SEQIDNO:13所示；枸杞ID:8，其序列如SEQIDNO:14所示；枸杞ID:9，其序列如SEQIDNO:15所示；

步骤1.2、对15个参考枸杞品种S基因的DNA序列进行比对，查找同源区和特异区，特异区可以用来区分不同的S基因；

步骤2.3、对15个参考枸杞品种S基因采用全覆盖的方式进行探针设计，探针长度120bp,不同S基因间相同序列的探针只保留一条；本实施例共设计出104条探针，104条探针序列如SEQIDNO:14-64所示；

步骤2、样品文库的制备，

枸杞样本基因组DNA经打断、末端修复、接头连接、接头产物纯化后，获得测序文库，然后进行文库扩增和文库纯化；具体操作如下：

步骤2.1、对枸杞基因组DNA进行准确定量；

用2.0dsDNA对枸杞基因组DNA进行准确定量；

步骤2.2、枸杞基因组DNA通过酶切进行打断，获得DNA片段；

步骤2.3、打断的基因组DNA进行末端修复：

末端修复体系：DNA片段1ng-200ng；End repair buffer 7ul；End repairenzyme1.2ul；总体积20ul。25℃20min；72℃20min；

步骤2.4、将末端修复后的DNA片段连接上接头；

接头连接体系：向末端修复体系中加入Ultra DNA ligase 1ul、接头Adaptor1ul，25℃20min

步骤2.5、将连接接头后的产物进行纯化

(1)、加入接头连接体系体积0.5倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，取上清转移至新的管中；

(2)、加入接头连接体系体积0.7倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；

(3)添加接头连接体系体积1倍的磁珠悬浮液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；

(4)加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。

(6)加入23μl Elution Buffer，充分悬浮磁珠，室温静置2min以洗脱DNA。将磁珠用磁铁吸附，所得到的上清DNA溶液吸至一新的管中，获得测序文库；其中，Elution Buffer为10mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5；

步骤2.6、文库扩增

经纯化晾干后的PCR离心管，加入PCR mix(石家庄博瑞迪生物技术有限公司，简称GenoBaits公司)10μL、barcode，超纯水稀释到总量20μL，放入PCR仪进行：98℃2min；98℃30s、50℃30s、72℃40s，8-12个循环；72℃4min。

8份枸杞样本的barcode分别为：TTGGTATTGT、GAACAAGCGG、AACAACAGGA、GGTCGGCTTG、TGGTGTGAGA、GGTGTGGTAT、TGTGTCTCGG、ACACCACCTA；

步骤2.7、文库纯化

将PCR离心管从磁力架中取出加入35μL Tris-Hcl，震荡混匀，静置5min，轻微离心后置于磁力架中，直至溶液澄清，移除上清液至新管。用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计进行定性或定量检测，合格后方可后续实验，-20℃保存。

步骤3、探针杂交：将纯化后的文库DNA与权利要求1所述的探针组合进行杂交捕获后，洗脱去除未结合的DNA，获得杂交后的DNA；

步骤3.1、探针的准备：

1.5ml的PCR离心管中加入纯化后的文库DNA0.6-1.0μg、5μL封闭液、测序仪封闭液II 2μL，300ng如实施例所述的探针组合，置于≤60℃的温度下真空浓缩至全干，得探针预混物；

步骤3.2、DNA文库杂交捕获

将探针预混物加入杂交缓冲液中，吸打或涡旋混匀，12,000rpm离心1min，室温静置5min，吸打或涡旋混匀，轻微离心，将全部液体移至0.2ml离心管中，放入PCR仪进行热循环孵化：95℃10min(热盖温度105℃)，65℃杂交(热盖温度75℃，可过夜)；

步骤3.3、杂交片段与杂交磁珠结合

杂交磁珠液使用前室温放置10min，涡旋震荡15s混匀，每个反应取50μL加入0.2ml离心管中，置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液；从磁力架中取出加入150μL杂交磁珠清洗缓冲液Ⅰ，涡旋震荡10s，置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液，重复2次；加入杂交液16μL，吸打10次混匀，放入PCR仪进行：热盖温度75℃；65℃45min，其中每12min，震荡5s。

步骤3.4、洗脱去除未结合的DNA

65℃洗脱：每管加入100μL 65℃预热的杂交磁珠清洗缓冲液Ⅰ，涡旋震荡5s混匀，离心5s；置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液；加入150μL 65℃预热的杂交磁珠清洗缓冲液Ⅰ，缓慢上下吸打10次(避免产生气泡)，放置2min，置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液，重复1次。

室温洗脱：继续加入150μL室温杂交磁珠清洗缓冲液Ⅰ，震荡2min；置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液；加入150μL室温杂交磁珠清洗缓冲液Ⅱ，震荡1min，置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液；加入150μL室温杂交磁珠清洗缓冲液Ⅲ，震荡30s，置于磁力架中，直至溶液澄清，去除上清液。

重悬磁珠：从磁力架中取出加入20μL超纯水，吸打10次。

步骤4、PCR富集

将杂交后的DNA进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；

向PCR管加入杂交后的DNA10μL、PCR mix(GenoBaits公司)15μL、测序仪适配Primer Mix(GenoBaits公司)1.2μL、超纯水3.8μL，混匀，放入PCR仪进行：热盖温度105℃；98℃45s；98℃15s、50℃30s、72℃40s，10-18个循环；72℃1min；hold at 4℃。

步骤5、PCR纯化

对PCR扩增产物进行纯化；

向每个PCR扩增产物中加入纯化液45μL，震荡混匀，静置5min，轻微离心后置于磁力架中，直至溶液澄清，移除上清液；加入100μL 80％乙醇，室温孵育30s，移除上清液；开盖10min，直至乙醇挥发干。将PCR离心管从磁力架中取出加入35μL Tris-Hcl，震荡混匀，静置5min，轻微离心后置于磁力架中，直至溶液澄清，移除上清液至新管。用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计进行定性或定量检测，合格后方可后续实验，-20℃保存。

步骤6测序

将纯化后的PCR扩增产物采用二代测序技术进行基因测序，获得待测枸杞样品S基因的测序结果；

步骤7、S基因的序列比对

将二代测序获得的待测枸杞样品S基因的测序结果与15个参考枸杞品种的S基因进行比对，判断待测枸杞样品的S基因与所述所述参考枸杞品种的S基因是否匹配，找出待测枸杞样品S基因所匹配的参考枸杞品种。

在进行S基因序列的比对过程中，通过reads数和Coverage值来区分不同的S基因，具体遵从以下原则：

1、去除比对到多个位置且比对值一致的reads(这样的reads出现是因为基因序列间有相同的reads，因此这些reads不能用来进行基因序列的区分)

2、保留唯一比对和在基因间比对有差异的reads，这些reads有助于进行基因序列的区分；

3、上述分析原则，深度≥10X，结果中有覆盖的就说明涵盖该基因，本实施例测得了8份枸杞样本的Coverage结果如下：

1)、待测样本Ly99-01：与枸杞品种ID：1的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.6928571，Reads_number(111)为163；与枸杞品种ID：6的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为552；结论：待测样本Ly99-0的两条染色体上具有枸杞品种ID：1和枸杞品种ID：6的S基因；

2)、待测样本Ly100-01：与枸杞品种ID：2的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.95，Reads_number(111)为421；与枸杞品种ID：HM195023的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为812；结论：待测样本Ly100-01的两条染色体上具有枸杞品种ID：2和枸杞品种ID：HM195023的S基因；

3)、待测样本Ly101-01：与枸杞品种ID：7的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.6952381，Reads_number(111)为227；与枸杞品种ID：HM195023的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为737；结论：待测样本Ly101-01的两条染色体上具有枸杞品种ID：7和枸杞品种ID：HM195023的S基因；

4)、待测样本Ly102-01：与枸杞品种ID：2的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.95，Reads_number(111)为516；与枸杞品种ID：3的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为469；结论：待测样本Ly102-01的两条染色体上具有枸杞品种ID：2和枸杞品种ID：3的S基因；

5)、待测样本Ly103-01：与枸杞品种ID：18的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为1074；与枸杞品种ID：2的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.95，Reads_number(111)为427；结论：待测样本Ly103-01的两条染色体上具有枸杞品种ID：2和枸杞品种ID：3的S基因；

6)、待测样本Ly105：与枸杞品种ID：1的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.7047619，Reads_number(111)为348；与枸杞品种ID：9的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为816；结论：待测样本Ly105的两条染色体上具有枸杞品种ID：1和枸杞品种ID：9的S基因；

7)、待测样本Ly106：与枸杞品种ID：1的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.7047619，Reads_number(111)为297；与枸杞品种ID：HM195027的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为1023；结论：待测样本Ly106的两条染色体上具有枸杞品种ID：1和枸杞品种ID：HM195027的S基因；

8)、待测样本Ly107：与枸杞品种ID：1的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为0.702381，Reads_number(111)为435；与枸杞品种ID：8的S基因的匹配结果为：Coverage(111)为1，Reads_number(111)为332；结论：待测样本Ly106的两条染色体上具有枸杞品种ID：1和枸杞品种ID：8的S基因。

以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

序列表

<110> 宁夏农林科学院枸杞科学研究所

<120> 一种基于靶向测序的枸杞S基因的快速分型鉴定方法

<130> 11

<160> 65

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 1

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<210> 2

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 2

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<210> 3

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 3

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<210> 4

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 4

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<210> 5

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 5

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<400> 6

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<210> 8

<211> 423

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

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<210> 9

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 9

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<210> 10

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 10

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<210> 11

<211> 378

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 11

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<210> 12

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<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 12

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agg 363

<210> 13

<211> 381

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 13

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gaaaaatatc ctggagatgt g 381

<210> 14

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 14

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<210> 15

<211> 420

<212> DNA

<213> 枸杞(未知)

<400> 15

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tcctggttca acttatcagc ttgatgatat cgaaaaggcc ataaagacag tttctataga 420

<210> 16

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 16

ccggtcaagc aaaaattggg ttataaaacg atcacggtaa attaccaaac taattttctc 60

aaatgttctt aattcattca ttcaaatttc accttagcgt ttgctcatat atttattgaa 120

<210> 17

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 17

acagcttcga taaccaatat ctctggaaaa aagaattcct aaaacatgga agctgtagta 60

tagagcgtta caaacaacct gcatattttg atttagcaat gaattcaaaa gacaagtttg 120

<210> 18

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 18

aaaacatgga agctgtagta tagagcgtta caaacaacct gcatattttg atttagcaat 60

gaattcaaaa gacaagtttg atctcttgag tactctcaga aatcatggaa ttactcctgg 120

<210> 19

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 19

gcatattttg atttagcaat gaattcaaaa gacaagtttg atctcttgag tactctcaga 60

aatcatggaa ttactcctgg ttcaacttat gaccttggtg atatcgaaaa ggccataaag 120

<210> 20

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 20

attttgattt agcaatgaat tcaaaagaca agtttgatct cttgagtact ctcagaaatc 60

atggaattac tcctggttca acttatgacc ttggtgatat cgaaaaggcc ataaagacag 120

<210> 21

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 21

atcacggtaa attaccaaac taattttctc aaatgttctt aattcattca ttcaaatttc 60

accttagcgt ttgctcatat atttattgaa tgaagccgtt tcaaaatgta tacaggatca 120

<210> 22

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 22

ttcaaatttc accttagcgt ttgctcatat atttattgaa tgaagccgtt tcaaaatgta 60

tacaggatca gaggaaagtg agtgagctgg acaaacgttg gcctcaactg aaacacgaga 120

<210> 23

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 23

gtgggctacc cagaagtgag ttatgatatc atcagggtaa attaccaaac taattttctc 60

aaatgttcgt aattcattga ttcaaatttc accttagcgt ttgttcatgc atttattgaa 120

<210> 24

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 24

atttattgaa tgaagccgtt tcaaaatgta tacaggatgc cagaaaaata agtgagctgg 60

acaaacgctg gcctcaactg aaatacgact accagtttgg tatagacgaa caatatctct 120

<210> 25

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 25

agtgagctgg acaaacgctg gcctcaactg aaatacgact accagtttgg tatagacgaa 60

caatatctct ggaaaaagga attcctaaaa catggaagct gtggtataaa gcggtaccca 120

<210> 26

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 26

accagtttgg tatagacgaa caatatctct ggaaaaagga attcctaaaa catggaagct 60

gtggtataaa gcggtaccca caacctgcat attttgattt agccatgaat ttaaaagaca 120

<210> 27

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 27

attcctaaaa catggaagct gtggtataaa gcggtaccca caacctgcat attttgattt 60

agccatgaat ttaaaagaca agtttgatct cttgagtact ctcagaaatc atgggattac 120

<210> 28

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 28

caacctgcat attttgattt agccatgaat ttaaaagaca agtttgatct cttgagtact 60

ctcagaaatc atgggattac tcctggttca acttatcagc ttgatgatat cgaaaaggcc 120

<210> 29

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 29

atcagggtaa attaccaaac taattttctc aaatgttcgt aattcattga ttcaaatttc 60

accttagcgt ttgttcatgc atttattgaa tgaagccgtt tcaaaatgta tacaggatgc 120

<210> 30

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 30

ttcaaatttc accttagcgt ttgttcatgc atttattgaa tgaagccgtt tcaaaatgta 60

tacaggatgc cagaaaaata agtgagctgg acaaacgctg gcctcaactg aaatacgact 120

<210> 31

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 31

ccggtcgacc gacaattccg ttatgatacg atcacggtaa attaccaaac taattttctc 60

aaatgttctt aattcattca ttcaaatttc accttagcgt ttgttcatat atttattgaa 120

<210> 32

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 32

acaatatctc tggaaaaatg aattcctaaa acatggaagc tgtggtatag agcggtacaa 60

acaacctgca tattttgatt tagccatgaa tttaaaagac aagtttgatc tcttgagtac 120

<210> 33

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 33

agcggtacaa acaacctgca tattttgatt tagccatgaa tttaaaagac aagtttgatc 60

tcttgagtac tcttagaaat aatgggatta ctcctggttc aacttatcag cttgatgata 120

<210> 34

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 34

caacctgcat attttgattt agccatgaat ttaaaagaca agtttgatct cttgagtact 60

cttagaaata atgggattac tcctggttca acttatcagc ttgatgatat cgaaaaggcc 120

<210> 35

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 35

gtcgtcgtca acccaccact gcgttatata aagttcagag taagttacca aactaacttt 60

ctcagatgct cgtaattcat tcattcaaat ttcaccttag tgttcgttca tatttttatt 120

<210> 36

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 36

tatttttatt gaatgaagcc gtttcaaaat gtatacagga tcccagagaa gtaactgagc 60

tggacaatcg ctggcctcaa ctgaaatact ctaaattcga tggtacagat agacaacctc 120

<210> 37

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 37

gtaactgagc tggacaatcg ctggcctcaa ctgaaatact ctaaattcga tggtacagat 60

agacaacctc tctggagacg tgaattccta aaacatggaa gctgtggtat aaataggtac 120

<210> 38

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 38

ctaaattcga tggtacagat agacaacctc tctggagacg tgaattccta aaacatggaa 60

gctgtggtat aaataggtac aaacaacctg catattttga tttagctatg aatttaaagg 120

<210> 39

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 39

tgaattccta aaacatggaa gctgtggtat aaataggtac aaacaacctg catattttga 60

tttagctatg aatttaaagg acaagtttga tctcttgagt actctcagaa atcatggaat 120

<210> 40

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 40

aaacaacctg catattttga tttagctatg aatttaaagg acaagtttga tctcttgagt 60

actctcagaa atcatggaat tactcctggt tcaacttatc agcttgatga tatcgaaaaa 120

<210> 41

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 41

caacctgcat attttgattt agctatgaat ttaaaggaca agtttgatct cttgagtact 60

ctcagaaatc atggaattac tcctggttca acttatcagc ttgatgatat cgaaaaagcc 120

<210> 42

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 42

taagttacca aactaacttt ctcagatgct cgtaattcat tcattcaaat ttcaccttag 60

tgttcgttca tatttttatt gaatgaagcc gtttcaaaat gtatacagga tcccagagaa 120

<210> 43

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 43

tcattcaaat ttcaccttag tgttcgttca tatttttatt gaatgaagcc gtttcaaaat 60

gtatacagga tcccagagaa gtaactgagc tggacaatcg ctggcctcaa ctgaaatact 120

<210> 44

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 44

aactttggta gaaataaaca atatctctgg aaaaatgaat tcctaaaaca tggaagctgt 60

agtataaagc ggtaccaaca gcctgcatat tttgatttag ccatgaattt aaaagacaag 120

<210> 45

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 45

gaaataaaca atatctctgg aaaaatgaat tcctaaaaca tggaagctgt agtataaagc 60

ggtaccaaca gcctgcatat tttgatttag ccatgaattt aaaagacaag tttgatctct 120

<210> 46

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 46

tcctaaaaca tggaagctgt agtataaagc ggtaccaaca gcctgcatat tttgatttag 60

ccatgaattt aaaagacaag tttgatctct tgagtactct cagaaatcat ggaattactc 120

<210> 47

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 47

gcctgcatat tttgatttag ccatgaattt aaaagacaag tttgatctct tgagtactct 60

cagaaatcat ggaattactc ctggttcaac ttatcagctt gatgatatcg aaaaggccat 120

<210> 48

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 48

tttgatttag ccatgaattt aaaagacaag tttgatctct tgagtactct cagaaatcat 60

ggaattactc ctggttcaac ttatcagctt gatgatatcg aaaaggccat aaagacagtt 120

<210> 49

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 49

catgaattta aaagacaagt ttgatctctt gagtactctc agaaatcatg gaattactcc 60

tggttcaact tatcagcttg atgatatcga aaaggccata aagacagttt ctataaaggt 120

<210> 50

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 50

ttgatctctt gagtactctc agaaatcatg gaattactcc tggttcaact tatcagcttg 60

atgatatcga aaaggccata aagacagttt ctataaaggt tccaagcctc aagtgcgtcg 120

<210> 51

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 51

tgagctggac aaacgctggc ctcaactgaa atatgagaac aactttggta gaaataaaca 60

atatctctgg aaaaatgaat tcctaaaaca tggaagctgt agtataaagc ggtaccaaca 120

<210> 52

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 52

aacaagaaca cactactgaa taactgcgcc cctggtgcaa catatcataa gatagacgat 60

ccaggtatgt tcaaacagat ggacgatcgg tggacagaac taacctcaga tgtaaaagat 120

<210> 53

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 53

agtaaaaaat atcaacgatt ctgggaacat gaattcttaa agcatggaac gtgttgtgag 60

ggtcatgata ctgaagaagc atattttaaa ttagccatgc gcttaaaaga cagatttgat 120

<210> 54

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 54

agcatggaac gtgttgtgag ggtcatgata ctgaagaagc atattttaaa ttagccatgc 60

gcttaaaaga cagatttgat cttttgacaa ttctcagagc tagtggaatt attcctggaa 120

<210> 55

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 55

atattttaaa ttagccatgc gcttaaaaga cagatttgat cttttgacaa ttctcagagc 60

tagtggaatt attcctggaa attattattc cattgacagc attcagaaag ccatcgaggg 120

<210> 56

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 56

cttttgacaa ttctcagagc tagtggaatt attcctggaa attattattc cattgacagc 60

attcagaaag ccatcgaggg agttactcga gcggttccaa atctatattg taatcctgat 120

<210> 57

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 57

gctagtggaa ttattcctgg aaattattat tccattgaca gcattcagaa agccatcgag 60

ggagttactc gagcggttcc aaatctatat tgtaatcctg atccaaataa cccaagaatg 120

<210> 58

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 58

catatcataa gatagacgat ccaggtatgt tcaaacagat ggacgatcgg tggacagaac 60

taacctcaga tgtaaaagat agtaaaaaat atcaacgatt ctgggaacat gaattcttaa 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 59

ggacgatcgg tggacagaac taacctcaga tgtaaaagat agtaaaaaat atcaacgatt 60

ctgggaacat gaattcttaa agcatggaac gtgttgtgag ggtcatgata ctgaagaagc 120

<210> 60

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 60

cgcagtaaga tttataataa attcacggat gacaaagaga agagcgatct gtacgaacgc 60

tggcctgacc tgaccatcac tgaatttgat tgtttagaca agcaagcttt ctggagccgt 120

<210> 61

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 61

gaatacataa agcatggcac gtgttgttca gacaagtttg atcgtgtgca atattttact 60

ttagccatgg ccttgaaaga caggttcgat cttttgaaat ctctgagaaa tcatggaatt 120

<210> 62

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 62

cagacaagtt tgatcgtgtg caatatttta ctttagccat ggccttgaaa gacaggttcg 60

atcttttgaa atctctgaga aatcatggaa ttattcgtgg atattcttat accgtccaaa 120

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<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 63

gacaagtttg atcgtgtgca atattttact ttagccatgg ccttgaaaga caggttcgat 60

cttttgaaat ctctgagaaa tcatggaatt attcgtggat attcttatac cgtccaaaag 120

<210> 64

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 64

agagcgatct gtacgaacgc tggcctgacc tgaccatcac tgaatttgat tgtttagaca 60

agcaagcttt ctggagccgt gaatacataa agcatggcac gtgttgttca gacaagtttg 120

<210> 65

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列(未知)

<400> 65

tgaatttgat tgtttagaca agcaagcttt ctggagccgt gaatacataa agcatggcac 60

gtgttgttca gacaagtttg atcgtgtgca atattttact ttagccatgg ccttgaaaga 120