一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备方法及应用,p54-H22细胞作为免疫原和p54-293T细胞作为检测原,所述的p54-H22细胞用的实验物为雌性Balb/c小鼠,所述的雌性Balb/c小鼠三免一周后采用IPMA方法测定,融合后的细胞的培养基与p54-293T细胞做IPMA检测筛选阳性杂交瘤细胞株,经三次亚克隆后获得了10株能够稳定分泌抗ASFV p54蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用p54-H22细胞的雌性Balb/c小鼠制备单抗。采用以上结构后,本发明具有如下优点:1、本实验中,用全细胞免疫小鼠,小鼠的IPMA效价达到较高水平,筛选到的抗体特异性高,杂交瘤筛选效果也较明显;2、小鼠血清IPMA效价可达1:25600,细胞融合后,最终通过IPMA法筛选出10株单克隆抗体,多株单克隆抗体使得实验数据更加准确可靠。