本发明涉及基因工程领域,具体涉及热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用。所述葡萄糖氧化酶突变体通过将氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的葡萄糖氧化酶的第4位、第70位、第86位、第96位、第274位、第508位中至少一个氨基酸进行取代获得。本发明提供葡萄糖氧化酶突变体,与野生型葡萄糖氧化酶相比,其热稳定性有了显著的提升,有利于该酶在工业化生产中应用。本发明对来源于黑曲霉的葡萄糖氧化酶进行分子改造,通过定点突变技术和易错PCR方法提高了葡萄糖氧化酶的热稳定性,为葡萄糖氧化酶的工业化应用奠定基础。