本发明提供一种适用于吖啶酯发光体系的化学发光底物液及其应用,属于化学发光分析技术领域。所述化学发光底物液包括底物A液和底物B液;其中,底物A液包括氧化剂和无机酸,且所述底物A液的pH小于1.5;底物B液包括无机碱和增强剂,且所述底物B液的pH大于13;其中,所述增强剂为表面活性剂。通过对使用的酸、碱、氧化剂和增强剂等进行筛选优化,从而能够有效增强试剂稳定性,提高项目测试线性范围以及灵敏度;同时,上述技术方案的化学发光底物液原料廉价易得,配制方法简单,不需要复杂昂贵设备,非常适合工业化生产,因此具有良好的实际应用价值。