具体实施方式

本发明公开了一种醋酸乌利司他固体制剂溶出曲线的测定方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明中所用试剂或仪器均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

本发明实施例的醋酸乌利司他片溶出曲线的测定方法包括如下步骤：

1、桨法

取参比制剂或待测制剂，分别在水、pH4.5磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液900mL中，采用桨法，50转/分钟，分别于5、10、15、20、30、45、60、90min时取样10mL，滤过，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质。测定样品的累积溶出度。

2、溶出度检测色谱条件

参考醋酸乌利司他片含量测定项下色谱条件：以缓冲液(取磷酸二氢钾4.7g，加水1000mL溶解，用三乙胺调节pH值至7.0)-有机相(乙腈-四氢呋喃＝40：15)(45:55)为流动相；流速为每分钟1.0mL；检测波长为305nm；柱温为26℃；选用Waters Symmetry Shield^TMRP18(4.6×150mm，5μm)色谱柱，作为本品溶出度检测方法。同时考虑溶出供试品浓度较小，样品进样体积选择20μL。

试验例1溶出曲线不同条件的效果对比

①醋酸乌利司他片溶出曲线测定

取参比制剂，分别在水、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、0.1mol/L盐酸溶液900mL中，采用桨法，50转/分钟，分别于5、10、15、20、30、45、60、90、120min时取样10mL，滤过，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质。测定样品的累积溶出度，结果见表1和图1。

表1

参比制剂在0.1mol/L盐酸溶液中15min溶出度大于85％；在水、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液中120min溶出度分别为8.45％、31.27％、7.37％。

在水、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液中未达到漏槽条件，需在溶出介质中添加表面活性剂，拟选择表面活性剂，设定目标溶出曲线在45min～120min内累积溶出度＞85％，筛选表面活性剂的用量。

②十二烷基硫酸钠(SDS)作为表面活性剂溶出曲线测定。

参考公开号为CN104865215A的中国专利申请公开了“一种醋酸乌利司他片剂及溶出度测定方法”，该专利通过选用水介质中添加表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)作为溶出介质，故优选溶出介质中添加表面活性剂为SDS，并对本品醋酸乌利司他片在不同溶出介质中的溶出行为进行测定。

取自制片，分别在水、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液900mL中，采用桨法，50转/分钟，分别于5、10、15、20、30、45、60min时取样10mL，滤过，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质。测定样品的累积溶出度：

表2

在不同介质添加十二烷基硫酸钠后，本品溶出均较快，溶出曲线在15min内累积溶出度已经大于85％，无法更好的区分和评价醋酸乌利司他片的质量。

同时十二烷基硫酸钠(SDS)在使用过程中不同纯度、厂家以及不同批号之间差异性较大，对其纯度和厂家要求较高，不利于日常试验活动。另外溶出实验操作过程中，在pH6.8磷酸盐缓冲液中随着溶液温度的降低SDS会与钾盐配伍形成沉淀析出，影响供试品溶液测定。

综上所述，后续采用吐温80作为溶出介质中表面活性剂，并对其用量进行筛选。

③吐温80用量的选择

取自制片，采用桨法，分别在900mL水、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液中加入不同量的吐温80，采用不同的转速进行考察，选用上述色谱条件，测定溶出曲线，结果见表3-5和图2-4：

表3水介质不同吐温量与转速的选择

由结果可知，在水介质中加入1.0％吐温80时，自制样品的累积溶出度达到预期设定目标(设定目标为45min～120min内累积溶出度＞85％)，每分钟50转与75转条件下，达到预期设定目标时间点分别为90min与60min，累积溶出度分别为87.84％与87.30％。

表4 pH4.5醋酸盐缓冲液不同吐温80量与转速的选择

由结果可知，在pH4.5醋酸盐缓冲液中加入1.0％吐温80时，自制样品的累积溶出度达到预期设定目标(设定目标为45min～120min内累积溶出度＞85％)，每分钟50转与75转条件下，达到预期设定目标时间点均为45min，累积溶出度分别为86.80％和86.30％。

表5 pH6.8磷酸盐缓冲液不同吐温80量与转速的选择

由结果可知，每分钟50转或75转条件下，在pH6.8磷酸盐缓冲液中加入1.0％吐温80时，自制样品的累积溶出度达到预期设定目标(设定目标为45min～120min内累积溶出度＞85％)，时间点分别为90min和45min，累积溶出度分别为87.78％和86.27％。

综上说明，在每分钟50转和75转条件下，pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水介质中加入1.0％吐温80，本品累积溶出度均可达到预期设定目标。

④转速的选择

取参比制剂，采用桨法，在转速为每分钟50转或75转，分别以900mL水+1.0％吐温80、pH4.5醋酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80为溶出介质进行考察，选用上述色谱条件，测定溶出曲线，结果见下表和图5。

表6参比制剂在不同转速条件下的溶出曲线结果

由结果可知，在pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水介质中加入1.0％吐温80，参比制剂的累积溶出度达到预期设定目标(设定目标为45min～120min内累积溶出度＞85％)，对比每分钟50转和75转条件下各时间点的累积溶出度，其结果无明显差异，选择转速为每分钟50转。

⑤吐温80不同厂家的筛选

分别取自制片，以900mL的pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水加入1.0％不同厂家(天津市风船化学试剂有限公司；国药集团化学试剂有限公司；四川金山制药有限公司)吐温80作为溶出介质，转速为每分钟50转，进行溶出试验，经90分钟时取样，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(风船；国药；金山)。分别于不同时间点注入液相色谱仪，结果见下表。

表7

由结果可知，在pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80溶液中供试品溶液主峰面积的RSD值为4.93％，大于2.0％，表明在室温条件下，用天津市风船化学试剂有限公司的吐温80配制的供试品溶液放置48小时不稳定。

综上可知，四川金山制药有限公司的吐温80优于天津市风船化学试剂有限公司和国药集团化学试剂有限公司的吐温80，选择四川金山制药有限公司的吐温80作为本品的表面活性剂。

⑥pH4.5介质的选择

取自制片，以900mL的pH4.5醋酸盐缓冲液、pH4.5磷酸盐缓冲液加入1.0％(四川金山制药有限公司)吐温80作为溶出介质，转速为每分钟50转，进行溶出试验，经90分钟时取样，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别于不同时间点注入液相色谱仪，结果见下表。

表8

试验结果可知，pH4.5醋酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80配制的对照品溶液主峰面积RSD值均小于2.0％，表明在室温条件下，放置24小时内稳定性均良好。其中供试品在磷酸盐缓冲液中稳定性优于醋酸盐缓冲液，拟定pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80作为本品的pH4.5溶出介质。

综合上述试验结果，选用pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80作为本品醋酸乌利司他片溶出介质。

⑦溶出曲线取样时间点的选择

取参比制剂，以900mL的pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80为溶出介质，桨法，转速为每分钟50转，分别于不同时间点取样10mL(并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质)，滤过，取续滤液，照“2、溶出度检测色谱条件”项下色谱条件，测定溶出曲线，结果见下表。

表9参比制剂溶出曲线试验结果

由结果可知，在pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80介质中，参比制剂在90min内累积溶出度均大于85％，故三种介质溶出曲线测定取样时间点定为5、10、15、20、30、45、60、90min。

试验例2所选溶出介质测定方法的验证

a.专属性试验

供试品溶液：取醋酸乌利司他片1片，分别置900mL溶出介质(0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80)中，50转每分钟，搅拌30min(0.1mol/L盐酸溶液)或90min(其余3种介质)后，取溶液，滤过，取续滤液。

对照品溶液：取醋酸乌利司他对照品约16.7mg，精密称定，置50mL量瓶中，加溶出介质(0.1mol/L盐酸溶液)或甲醇(其余3种介质)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取5mL，置50mL量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述各介质项下溶液20μL，照“2、溶出度检测色谱条件”项下色谱条件注入液相色谱仪，结果见下表：

表10

由结果可知，空白溶剂及空白辅料均不干扰醋酸乌利司他的测定，本法测定四种介质的溶出度专属性较好。

b.滤膜吸附试验

供试品溶液与对照品溶液配制同上述“a.专属性试验”项下溶液。

离心溶液：取对照品溶液及供试品溶液进行离心处理(3000rpm离心20min)后取上清液。

滤膜过滤溶液(对照品与供试品)：取溶液用0.45μm有机滤膜滤过，弃去2、4、6、8mL滤液后，取相应的续滤液。

精密量取上述各介质项下溶液20μL，照“2、溶出度检测色谱条件”项下色谱条件注入液相色谱仪，结果见下表：

表11对照品滤膜吸附试验结果

表12供试品滤膜吸附试验结果

由结果可知，在0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80介质中，对照品溶液及供试品溶液滤膜过滤与离心结果比较，吸附率均小于2.0％，说明对照品溶液及供试品溶液可以用滤膜过滤，滤膜不干扰溶出度的测定。

c.精密度

精密量取上述“a.专属性试验”项下四个溶出介质配制的对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，分别连续测定6次，结果见下表。

表13精密度试验结果

结论：在0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80介质中，对照品溶液连续测定6次保留时间和峰面积的RSD值均小于2.0％。表明仪器进样精密度符合要求。

d.线性关系与范围

取醋酸乌利司他对照品约16.7mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备液；精密量取线性贮备液适量，用溶出介质定量稀释制成不同浓度的线性溶液。

精密量取上述各介质项下溶液20μL，照“2、溶出度检测色谱条件”项下色谱条件注入液相色谱仪，结果见下表：

表14 0.1mol/L盐酸溶液—线性与范围结果

表15 pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80—线性试验结果

表16 pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80—线性试验结果

表17水+1.0％吐温80—线性试验结果

由结果可知，0.1mol/L盐酸溶液中醋酸乌利司他在6.67μg/mL～40.01μg/mL浓度范围内，线性方程为y＝0.9363x+0.2614，相关系数r＝0.9997，线性关系良好；

pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质中醋酸乌利司他在3.33μg/mL～39.95μg/mL浓度范围内，线性方程为y＝0.9622x+0.1990，相关系数r＝0.9998，线性关系良好；

pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质中醋酸乌利司他在3.32μg/mL～39.78μg/mL浓度范围内，线性方程为y＝0.9389x+0.1031，相关系数r＝0.9999，线性关系良好；

水+1.0％吐温80介质中醋酸乌利司他在3.33μg/mL～39.98μg/mL浓度范围内，线性方程为y＝0.9491x+0.0049，相关系数r＝1.0000，线性关系良好。

e.溶液稳定性

精密量取“a.专属性试验”项下对照品溶液与供试品溶液各20μL，分别于不同时间注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见下表。

表18溶液稳定性试验结果

结论：试验结果表明，在常温条件下，对照品溶液与供试品溶液在0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80、水+1.0％吐温80介质中48h内稳定。

f.准确度

精密称取醋酸乌利司他对照品及相应处方量辅料适量制成20％、80％、120％浓度的供试品溶液，每个平行3份进行试验。

精密量取上述各介质项下溶液20μL，照“2、溶出度检测色谱条件”项下色谱条件注入液相色谱仪，结果见下表：

表19 0.1mol/L盐酸溶液—回收率试验结果

表20 pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80—回收率试验结果

表21 pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80—回收率试验结果

表22水+1.0％吐温80—回收率试验结果

结论：在0.1mol/L盐酸溶液介质中，本品回收率为99.58％～100.88％，9份回收率溶液的RSD值为0.39％；在pH4.5磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质中，本品回收率为98.46％～99.85％，9份回收率溶液的RSD值为0.40％；在pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质中，本品回收率为99.66％～100.69％，9份回收率溶液的RSD值为0.37％；在水+1.0％吐温80介质中，本品回收率为100.03％～100.61％，9份回收率溶液的RSD值为0.19％。均符合要求，说明该方法准确度良好。

综合上试验结果可知，本方法专属性良好，滤膜无吸附，稳定性良好，能准确测定醋酸乌利司他片在各介质中各取样时间点的溶出度，有效的对药品质量进行对比研究。

试验例4与现有专利方法的效果对比

为验证选用溶出条件是否能分辨不同工艺批次样品的质量差异，试验中使用原研制剂和不同处方样品(处方见下表)，

表23

分别选用代表性自拟pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质和公开号为CN104865215A的中国公开专利“一种醋酸乌利司他片剂及溶出度测定方法”水+0.3％十二烷基硫酸钠(SDS)溶出介质，检测其溶出曲线，对比结果。

a.自拟条件(代表介质pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80)

取不同处方样品和原研制剂各6片，900mL的pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80为溶出介质，桨法，转速为每分钟50转，分别于不同时间点取样10mL(并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质)，滤过，取续滤液，测定溶出曲线。结果见下表和图10。

表24 pH6.8磷酸盐缓冲液+1.0％吐温80介质溶出曲线

由结果可知，在此溶出条件下，不同处方的3批自制样品及原研样品进行溶出曲线测定，不同溶出行为的差异明显，说明本方法具有较强的区分力，适用于该制剂用于分辨不同工艺批次样品的质量差异。

b.专利条件(水+0.3％十二烷基硫酸钠溶出介质)

取不同处方样品和原研制剂各6片，900mL的水+0.3％十二烷基硫酸钠为溶出介质，桨法，转速为每分钟50转，分别于不同时间点取样10mL(并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质)，滤过，取续滤液，测定溶出曲线。结果见下表和图11。

表25水+0.3％十二烷基硫酸钠介质溶出曲线

由结果可知，添加十二烷基硫酸钠后，本品溶出均较快，溶出曲线在15min内累积溶出度已经大于85％，无法更好的运用f2值进行区分和评价醋酸乌利司他片的质量。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。