1-（3-吡啶基）-3-（二甲氨基）-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法
技术领域
本发明涉及医药化学
技术领域
，尤其涉及一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法。背景技术
1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮作为尼洛替尼(Nilotinib)、伊马替尼(Imatinib)等多种抗癌类药物的起始物料或中间体，其分子式为C10H12N2O，分子量为176.2151。其市场供应稳定，且价格便宜，特别适合应用于原料药合成。目前国家对原料药的要求越来越高，而1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮作为多种抗癌药物合成的起始反应物料或中间体，其存在的潜在杂质均有可能引入API中，为减少API的潜在风险，有必要对1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的质量进行监控。尼洛替尼及伊马替尼化学结构式如下：
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法，本发明提供的检测方法可以有效检测1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中的杂质，且杂质与1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的分离度较高。
本发明提供了一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法，包括以下步骤：
1)将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮和乙腈的水溶液混合，得到供试液a；
将待测杂质分别与乙腈混合，得到各杂质贮备液；
取用适量各杂质贮备液分别与乙腈的水溶液混合，得到各杂质对照品溶液；
将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮、适量各杂质贮备液和乙腈的水溶液混合，得到系统适用性溶液b；
2)将乙腈的水溶液、杂质对照品溶液、供试液a和系统适用性溶液b分别采用HPLC进行检测，所述检测的条件为：
以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；
流动相包括流动相A和流动相B，以磷酸二氢钠溶液和乙腈为流动相A，以甲醇和乙腈为流动相B，进行等梯度洗脱；
3)根据步骤2)得到的HPLC图谱，通过计算，得到杂质的检测结果。
优选的，步骤3)中，所述流动相A中，磷酸二氢钠溶液和乙腈的体积比为950：50；
所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.005～0.1mol/L，pH值为5.5～8.5；
所述流动相B中，甲醇和乙腈的体积比为500：500。
优选的，步骤3)中，所述流动相A和流动相B的体积比为20～97：3～80。
优选的，步骤3)中，所述流动相的流速为0.7～0.9mL/min；
所述检测的色谱柱的柱温为20～50℃。
优选的，步骤3)中，所述流动相的流速为0.8mL/min；
所述检测的色谱柱的柱温为40℃；
所述检测的色谱柱为YMC-Triart C18，柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm；
所述检测的波长为230nm。
优选的，步骤3)中，所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的体积比为：
优选的，各杂质贮备液包括式(1)杂质的贮备液、式(2)杂质的贮备液、式(3)杂质的贮备液、式(4)杂质的贮备液和式(5)杂质的贮备液；
优选的，每种杂质的贮备液中，杂质的浓度为1～1000μg/mL；
每种杂质对照品溶液中，杂质的浓度为0.05～50μg/mL。
优选的，所述供试液a中，1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.05～5mg/mL。
优选的，所述系统适用性溶液b中，所述1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.05～5mg/mL，杂质的浓度为0.05～50μg/mL。
本发明提供了一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法，包括以下步骤：1)将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮和乙腈的水溶液混合，得到供试液a；将待测杂质分别与乙腈混合，得到各杂质贮备液；取用适量各杂质贮备液分别与乙腈的水溶液混合，得到各杂质对照品溶液；将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮、适量各杂质贮备液和乙腈的水溶液混合，得到系统适用性溶液b；2)将乙腈的水溶液、杂质对照品溶液、供试液a和系统适用性溶液b分别采用HPLC进行检测，所述检测的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相包括流动相A和流动相B，以磷酸二氢钠溶液和乙腈为流动相A，以甲醇和乙腈为流动相B，进行等梯度洗脱；3)根据步骤2)得到的HPLC图谱，通过计算，得到杂质的检测结果。本发明提供的1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法为外标法，能够准确的检测出1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中的各杂质，且杂质与1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的分离度较高，各杂质之间的分离度也较高，各项指标均符合要求，且操作简单方便、成本低，适合广泛使用。
附图说明
图1为体积浓度为10％的乙腈的水溶液的HPLC图谱；
图2为本发明实施例1的系统适用性溶液b的HPLC图谱；
图3为本发明实施例1的供试品溶液a的HPLC图谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法，包括以下步骤：
1)将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮和乙腈的水溶液混合，得到供试液a；
将待测杂质分别与乙腈混合，得到各杂质贮备液；
取用适量各杂质贮备液分别与乙腈的水溶液混合，得到各杂质对照品溶液；
将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮、适量各杂质贮备液和乙腈的水溶液混合，得到系统适用性溶液b；
2)将乙腈的水溶液、杂质对照品溶液、供试液a和系统适用性溶液b分别采用HPLC进行检测，所述检测的条件为：
以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；
流动相包括流动相A和流动相B，以磷酸二氢钠溶液和乙腈为流动相A，以甲醇和乙腈为流动相B，进行等梯度洗脱；
3)根据步骤2)得到的HPLC图谱，通过计算，得到杂质的检测结果。
本发明将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮和乙腈的水溶液混合，得到供试液a。
在本发明的某些实施例中，所述乙腈的水溶液的体积浓度为10％。
在本发明的某些实施例中，所述供试液a中，1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.05～5mg/mL。在某些实施例中，所述供试液a中，1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.5mg/mL。
本发明将待测杂质分别与乙腈混合，得到各杂质贮备液。
在本发明的某些实施例中，所述各杂质贮备液包括式(1)杂质的贮备液、式(2)杂质的贮备液、式(3)杂质的贮备液、式(4)杂质的贮备液和式(5)杂质的贮备液；
在本发明的某些实施例中，每种杂质的贮备液中，杂质的浓度为1～1000μg/mL。在某些实施例中，每种杂质的贮备液中，杂质的浓度为100μg/mL。
在本发明的某些实施例中，所述乙腈的水溶液的体积浓度为10％。
在本发明的某些实施例中，各杂质贮备液中的杂质浓度相同。
本发明中，取用适量各杂质贮备液分别与乙腈的水溶液混合，得到各杂质对照品溶液。
本发明对取用适量各杂质贮备液的用量并无特殊的限制，可以根据实际情况取用需要的量。
在本发明的某些实施例中，每种杂质对照品溶液中，杂质的浓度为0.05～50μg/mL。在某些实施例中，每种杂质对照品溶液中，杂质的浓度为5μg/mL。
在本发明的某些实施例中，所述乙腈的水溶液的体积浓度为10％。
在本发明的某些实施例中，所述各杂质对照品溶液中的杂质浓度相同。
本发明将1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮、适量各杂质贮备液和乙腈的水溶液混合，得到系统适用性溶液b。
本发明对此处提及的适量各杂质贮备液的用量并无特殊的限制，可以根据实际情况取用需要的量。
在本发明的某些实施例中，所述乙腈的水溶液的体积浓度为10％。
在本发明的某些实施例中，所述系统适用性溶液b中，所述1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.05～5mg/mL，杂质的浓度为0.05～50μg/mL。在某些实施例中，所述系统适用性溶液b中，所述1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的浓度为0.5mg/mL。在某些实施例中，所述系统适用性溶液b中，杂质的浓度为5μg/mL。
得到各杂质贮备液、各杂质对照品溶液、供试液a和系统适用性溶液b后，将乙腈的水溶液、杂质对照品溶液、供试液a和系统适用性溶液b分别采用HPLC进行检测。
在本发明的某些实施例中，所述乙腈的水溶液的体积浓度为10％。
所述检测的条件为：
以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；
流动相包括流动相A和流动相B，以磷酸二氢钠溶液和乙腈为流动相A，以甲醇和乙腈为流动相B，进行等梯度洗脱。
本发明中，流动相包括流动相A和流动相B，以磷酸二氢钠溶液和乙腈为流动相A，以甲醇和乙腈为流动相B，进行等梯度洗脱。
在本发明的某些实施例中，所述流动相A中，磷酸二氢钠溶液和乙腈的体积比为950：50。在本发明的某些实施例中，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.005～0.1mol/L，pH值为5.5～8.5。在某些实施例中，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.01mol/L，pH值为7.0。
在本发明的某些实施例中，所述流动相B中，甲醇和乙腈的体积比为500：500。
在本发明的某些实施例中，所述流动相A和流动相B的体积比为20～97：3～80。
在本发明的某些实施例中，所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的体积比为：
在本发明的某些实施例中，所述流动相的流速0.7～0.9mL/min。在某些实施例中，所述流动相的流速为0.8mL/min。
在本发明的某些实施例中，所述检测的色谱柱的柱温为20～50℃。在某些实施例中，所述检测的色谱柱的柱温为40℃。
在本发明的某些实施例中，所述检测的色谱柱为YMC-Triart C18，柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm。
在本发明的某些实施例中，所述检测的波长为230nm。
所述检测完成后，根据上述步骤得到的HPLC图谱，通过计算，得到杂质的检测结果。
本发明中，已知杂质采用外标法计算，未知杂质采用0.5％自身对法计算。
本发明对上文采用的原料的来源并无特殊的限制，可以为一般市售。
本发明提供的1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法为外标法，能够准确的检测出1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中的各杂质，且杂质与1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的分离度较高，各杂质之间的分离度也较高，各项指标均符合要求，且操作简单方便、成本低，适合广泛使用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮中杂质的检测方法进行详细描述，但不能将其理解为对本发明保护范围的限定。
实施例中，已知杂质采用外标法计算，未知杂质采用0.5％自身对法计算。
实施例1
仪器与条件：
检测器：UV检测器；
色谱柱：YMC-Triart C18，柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm；
检测波长：230nm；
流动相：
A:0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(pH为7.0)-乙腈(体积比为950：50)
B:甲醇-乙腈(体积比为500：500)；
柱温：40℃；
流速：0.8mL/mim；
时间程序：
溶剂：乙腈的水溶液，体积浓度为10％；
进样量：10μL。
实验步骤：
取10mg 1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮，精密称定，加溶剂溶解并稀释成每1mL中含0.5mg的供试品溶液a；
取杂质式(1)、式(2)、式(3)、式(4)、式(5)各10mg，精密称定，分别加乙腈溶解并稀释成每1mL含杂质100μg的杂质贮备液；分别精密量取各杂质贮备液1.0mL，用溶剂稀释成每1mL中含5μg各杂质对照品溶液；取10mg 1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮，精密称定，加适量溶剂溶解，分别精密量取各杂质贮备液1.0mL加入，用溶剂稀释成每1mL中含有0.5mg的1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮、杂质式(1)、式(2)、式(3)、式(4)、式(5)各5μg的系统适用性溶液b。
精密吸取体积浓度为10％的乙腈的水溶液10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，记录图谱。精密吸取各杂质对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，记录图谱。精密吸取上述供试品溶液a 10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，记录图谱。精密吸取上述系统适用性溶液b 10μL，注入高效液相色谱仪进行检测，记录图谱。其中，杂质式(1)对应杂质A，杂质式(2)对应杂质B，杂质式(3)对应杂质C，杂质式(4)对应杂质D，杂质式(5)对应杂质E。
根据上述步骤得到的HPLC图谱，通过计算，得到杂质的检测结果。
图1为体积浓度为10％的乙腈的水溶液的HPLC图谱。
图2为本发明实施例1的系统适用性溶液b的HPLC图谱。
图3为本发明实施例1的供试品溶液a的HPLC图谱。
实验结果总结如表1和表2所示。
表1实施例1的系统适用性溶液b的HPLC检测及计算结果
名称
RT(min)
RRT
拖尾因子
分离度
塔板数
杂质A
20.669
0.824
1.019
44.751
49541.5
杂质E
21.817
0.870
0.908
3.012
49974.6
杂质C
25.081
1.000
1.083
9.549
116870.9
主峰
25.842
1.030
1.147
2.602
126305.8
杂质D
27.341
1.090
0.988
4.274
70941.8
杂质B
28.579
1.139
1.250
3.338
119167.8
表2实施例1的供试品溶液a的HPLC检测及计算结果
由表1可知，主峰及各杂质均达到基线分离，拖尾因子均在0.9至1.5之间，理论塔板数均大于10000，各峰峰型良好。且主峰与相邻杂质之间，杂质与杂质之间分离度均大于1.5，符合要求。满足1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮有关物质的测定，该方法系统适用性良好。
由表2可知，该批次样品1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮的纯度为99.72％，其他最大单杂的质量含量为0.1％，总杂的质量含量为0.28％。
精密度测试：
进样精密度：取1份供试液a连续进样6针；重复性试验：取2份混合杂质对照品溶液(五种杂质的储备液各取1ml，同置于20ml量瓶中，加乙腈水溶液稀释定容既得)各进两针，取6份供试液a各进一针，中间中密度同重复性试验，只是在不同日期换人和仪器重做试验。
精密度测试的结果如表3所示。
表3精密度测试结果
由表3可知，重复性、中间精密度以及进样精密度均为检出已知杂质，且最大单杂、总杂均为0.10wt％和0.28wt％，各RSD值均小于1.0％，符合要求，该方法精密度良好。
检测限与定量限测试：
取供试液a及各杂质对照品溶液分别注入液相色谱仪检测，并根据结果逐级稀释，直至检测出各物质的响应值，按S/N≈10作为定量限，S/N≈3作为检测限。检测结果如表4所示。
表4检测限与定量限检测结果
由表4可知，主峰与各杂质检测限浓度均在20ng/mL至85ng/mL之间，定量限浓度均在70ng/mL至280ng/mL之间，方法检测灵敏度良好。
供试品及各杂质线性关系良好说明本方法在线性浓度的范围内均能检出，且检出结果是准确可靠，不会因为供试品中含有微量杂质而不能检出。
准确度测试：
取2份混合杂质对照品溶液(五种杂质的储备液各取1ml，同置于20ml量瓶中，加乙腈水溶液稀释定容既得)各进2针；1份供试液a进1针；3份供试液a添加80％杂质限度的试样各进1针；3份供试液a添加100％杂质限度的试样各进1针；3份供试液a添加120％杂质限度的试样各进1针(添加不同杂质限度的溶液各配3份，以下回收率的结果仅是平均值)。
准确度测试的结果如表5所示。
表5准确度测试结果
由表5可知，各杂质回收率均在92％～105％之间，且各回收率RSD值均小于5％，符合要求。该方法准确度良好。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
