一种阿司匹林有关物质的检测方法
技术领域
本发明属于药品检测领域，涉及一种阿司匹林有关物质的检测方法。
背景技术
阿司匹林自1898年作为解热镇痛抗消炎药诞生以来，已经有了百年历史，现代医学发现它还具有：1)降低短暂性脑缺血发作及继发性脑猝中的风险；2)降低稳定型和不稳定型心绞痛患者的发病风险；3)预防大手术后血小板血栓形成的风险；4)降低高危心血管疾病患者心肌梗死发作的风险以及其他一些应用。是老药新用的典型药物之一。
产品的有关物质的控制对产品质量控制至关重要，而目前针对阿司匹林有关物质的检测方法中，中国药典中只收录了水杨酸的检测方法，该无法检测其他杂质。其他国外药典中收录的有关物质检测方法均相同，但经发明人方法重现后发现，国外药典方法不能有效分离已知杂质和未知杂质，且存在灵敏度、峰型不够好的现象，为了保证该制剂在研究、生产、贮存、销售和使用过程中的质量，确保药品安全有效，亟需提供一种灵敏度较高，各杂质之间的分离度较好的检测方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种阿司匹林有关物质的检测方法，本发明所述的色谱条件与欧洲药典中提供的标准色谱条件对比，不管是杂质的峰型还是分离度，较原色谱条件均有改善。
目前，阿司匹林原料药合成中工艺中，最终产品中可能含有的已知杂质共有以下6个杂质：
一种阿司匹林有关物质的检测方法，包括以下步骤：
采用高效液相色谱对阿司匹林有关物质进行定量检测；
高效液相色谱条件包括：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相A：磷酸-水；
流动相B：乙腈；
流速：1.0ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：237nm；
稀释剂：流动相A-乙腈。
进一步的，洗脱程序如下：
进一步的，所述有关物质是4-羟基苯甲酸、4-羟基间苯二甲酸、水杨酸、2-((羟基甲苯酰基)氧基)苯甲酸、水杨酸-2-羧基苯酯和2-(乙酰氧基)苯甲酸酐。
进一步的，将供试品溶液和系统适用性溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，所述供试品溶液和系统适用性溶液配置方法如下：
分别取杂质4-羟基苯甲酸、4-羟基间苯二甲酸、水杨酸、2-((羟基甲苯酰基)氧基)苯甲酸、水杨酸-2-羧基苯酯和2-(乙酰氧基)苯甲酸酐对照品，加乙腈稀释成0.1g/L的溶液，作为各杂质储备液；
取阿司匹林原料药，加入杂质储备液适量，用稀释剂配制成含阿司匹林1g/L和含各杂质0.001g/L的混合溶液，作为系统适用性溶液；
取阿司匹林加稀释剂超声溶解，配制为1g/L的溶液，作为供试品溶液。
进一步的，所述稀释剂中流动相A与乙腈的体积比为4:1。
进一步的，取阿司匹林原料药，加稀释剂在冰水浴中超声，定容为1g/L的溶液，离心取上清液作为供试品溶液；取供试品溶液采用稀释剂稀释1000倍，作为0.1％自身对照溶液。
进一步的，流动相A中，磷酸与水的比例为1：300。
进一步的，进样盘温度为4℃。
进一步的，记录色图谱，用自身对照法进行测定，计算单个杂质和总杂质的含量。
进一步的，单个杂质和总杂质的计算方法为：
单个杂质％＝单个杂质峰面积/0.1％对照峰面积*0.1*100％；
总杂质％＝杂质峰面积之和/0.1％对照峰面积*0.1*100％。
一种阿司匹林有关物质的检测方法，包括以下步骤：
(1)溶液配制：
量取800ml流动相A加入200ml乙腈，摇匀，作为空白溶液即稀释剂溶液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林，加稀释剂超声溶解，配制为1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
(2)色谱条件：
仪器：岛津LC-2030C-PLUS；检测器：UV
色谱柱：Welch Uitimate AQ-C18(5μm,4.6*250mm)；
流动相A：磷酸-水(1:300)；
流动相B：乙腈；
流速：1.0ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：237nm；
进样盘温度：4℃；
洗脱程序如下表：
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
有益效果
与现有技术相比，本发明提供的色谱条件各杂质之间与主峰之间分离度良好且峰型良好，基线波动平缓，不管是杂质的峰型还是分离度，较原色谱条件均有改善。
附图说明
图1为欧洲药典色谱条件下系统适用性溶液色谱图；
图2为检测方法一色谱条件下系统适用性溶液与供试品溶液色谱图；
图3为检测方法二色谱条件下系统适用性溶液与供试品溶液色谱图；
图4为检测方法二和三色谱条件下空白溶液色谱图；
图5为检测方法四色谱条件下系统适用性溶液与供试品溶液色谱图；
图6为检测方法五色谱条件下系统适用性溶液与供试品溶液色谱图；
图7为检测方法六色谱条件下系统适用性溶液与供试品溶液色谱图；
图8为检测方法二和六色谱条件下空白溶液色谱图；
图9为阿司匹林原料药在酸破坏条件下的色谱图；
图10为阿司匹林原料药在碱破坏条件下的色谱图；
图11为阿司匹林原料药在氧破坏条件下的色谱图；
图12为阿司匹林肠溶片样品有关物质检测图谱。
具体实施方式
实施例1
阿司匹林有关物质的检测方法一：
(1)溶液配制：
量取750ml流动相A加入250ml乙腈，摇匀，作为空白溶液即稀释剂溶液；
分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品适量，分别加乙腈稀释成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各0.1mg的溶液，作为各杂质A、B、C、D、E、F储备液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林，加稀释剂超声溶解，配制为1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
(2)色谱条件：
仪器：岛津LC-2030C-PLUS；检测器：UV
色谱柱：Welch Uitimate AQ-C18(5μm,4.6*250mm)；
流动相A：磷酸-水(1:300)；
流动相B：乙腈；
流速：1.0ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：237nm；
进样盘温度：4℃；
洗脱程序如下表：
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图2。
(4)结果：由图2可知，该方法与欧洲药典色谱条件下系统适用性溶液色谱图相比，明显改善了杂质A、B与其之间夹杂的未知杂质峰之间的分离度，但杂质A中包裹了其他杂质，该方法需继续优化。
实施例2
阿司匹林有关物质的检测方法二：
(1)溶液配制：
量取800ml流动相A加入200ml乙腈，摇匀，作为空白溶液即稀释剂溶液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林，加稀释剂超声溶解，配制为1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
(2)色谱条件：
除洗脱程序作相应调整外(见下表)，其余同实施例1色谱条件。
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图3。
4)结果：由图3可知，方法二与方法一色谱条件下系统适用性溶液色谱图相比，杂质A与其包裹的未知杂质达到基线分离，但在主峰位置基线波动较大，该方法需继续优化。
实施例3
阿司匹林有关物质的检测方法三：
(1)溶液配制：见实施例2。
(2)色谱条件：
除洗脱程序作相应调整外(见下表)，其余同实施例1色谱条件。
(3)测定：取空白溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图4。
4)结果：有图4可知，方法三与方法二色谱条件下空白溶液色谱图相比，基线波动问题未得到改善，该方法需继续优化。
实施例4
阿司匹林有关物质的检测方法四：
(1)溶液配制：
量取700ml流动相A加入300ml乙腈，摇匀，作为空白溶液即稀释剂溶液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林，加稀释剂超声溶解，配制为1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
(2)色谱条件：
除洗脱程序作相应调整外(见下表)，其余同实施例1色谱条件。
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图5。
(4)结果：方法四与方法二色谱条件下系统适用性溶液色谱图相比，基线平稳，由图5可知，杂质C中有杂峰包裹其中，方法需继续优化。
实施例5
阿司匹林有关物质的检测方法五：
(1)溶液配制：见实施例1。
(2)色谱条件：
色谱柱：SHIMADZU shim-pack GIST C18(5μm,4.6*150mm)；
除色谱柱作相应调整外，其余同实施例2色谱条件。
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图6。
(4)结果：方法五与方法二色谱条件下系统适用性溶液色谱图相比，更换色谱柱未能解决基线波动大及杂质A包裹杂质峰的问题，方法需继续优化。
实施例6
阿司匹林有关物质的检测方法六：
(1)溶液配制：更换实施例2中磷酸的等级与厂家。
(2)色谱条件：同实施例2色谱条件。
(3)测定：分别取供试品溶液和系统适用性溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图7。
(4)结果：方法六色谱条件下系统适用性溶液色谱图，各杂质之间与主峰之间分离度良好且峰型良好，如图8所示，与实施例2色谱条件相比，基线波动平缓。
实施例7
阿司匹林溶液稳定性实验：
(1)溶液配制：
量取800ml流动相A加入200ml乙腈，摇匀，作为空白溶液即稀释剂溶液；
分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品适量，分别加乙腈稀释成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各0.1mg的溶液，作为各杂质A、B、C、D、E、F储备液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林肠溶片10片，研磨成细粉，取适量加稀释剂在冰水浴中超声，后定容为1mg/ml的溶液，离心取上清液作为供试品溶液；
取供试品溶液0.1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂定容，作为0.1％自身对照溶液。
(2)色谱条件：
同实施例2
(3)测定：分别量取系统适用性溶液、供试品溶液、0.1％自身对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，数据见下表1～3。
表1系统适用性溶液稳定性
表2供试品溶液稳定性
杂质
0h峰面积
1.5h峰面积
RD/％
RT＝11.6min
3424
3552
1.83
ASPI
16702193
16689684
0.04
IMPC
22712
29783
13.47
IMPD
7893
7906
0.08
表3 0.1％自身对照溶液稳定性
时间
0h
3.0h
4.0h
5.0h
6.5h
7.5h
9.0h
11.5h
峰面积
20698
20905
20720
20768
20700
20804
20645
20499
RD/％
/
0.50
0.05
0.17
0.00
0.26
0.13
0.48
(4)结果：从以上表格中可以看出，0.1％自身对照溶液稳定性良好，在11.5h内稳定，系统适用性溶液与供试品溶液在1.6h内不稳定，该方法需进一步优化。
实施例8
阿司匹林溶液稳定性实验：
(1)溶液配制：
用乙腈作为空白溶液即稀释剂溶液；
分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品适量，分别加乙腈稀释成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各0.1mg的溶液，作为各杂质A、B、C、D、E、F储备液；
取阿司匹林肠溶片10片，研磨成细粉，取适量加稀释剂在冰水浴中超声，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
取阿司匹林肠溶片粉末适量，加稀释剂在冰水浴中超声，定容为1mg/ml的溶液，离心取上清液作为供试品溶液；
取供试品溶液0.1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂定容，作为0.1％自身对照溶液。
(2)色谱条件：
同实施例2
(3)测定：分别量取系统适用性溶液、0.1％自身对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，数据见下表4～5。
表4系统适用性溶液稳定性数据
表5 0.1％自身对照溶液稳定性数据
时间
0h
7.0h
12.0h
15.5h
18.5h
20.5h
23.5h
峰面积
18647
18339
18182
18063
18002
18026
18069
RD/％
/
0.83
1.26
1.59
1.76
1.69
1.57
(4)结果：从以上表格中可以看出，系统适用性溶液稳定性良好，在16h内稳定，0.1％自身对照溶液稳定性良好，在23.5h内稳定，故稀释剂更换为乙腈。
实施例8
阿司匹林原料药溶液强制降解实验：
(1)溶液配制：
用乙腈作为空白溶液即稀释剂溶液；
分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品适量，分别加乙腈稀释成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各0.1mg的溶液，作为各杂质A、B、C、D、E、F储备液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液；
样品未破坏：取阿司匹林原料药适量，加稀释剂，定容为1mg/ml的溶液，即得；
酸碱空白：取1.0ml 0.1M氢氧化钠溶液于10ml容量瓶中，再加入1.0ml 0.1M盐酸溶液中和后，定容即得；
10％氧化空白：取1.0ml 10％H2O2于10ml容量瓶中，定容即得；
样品酸破坏：称取约10mg的阿司匹林于10ml容量瓶中，加入1.0ml 0.1M盐酸溶液，室温放置18h，再加入1.0ml 0.1M氢氧化钠溶液中和后，定容即得；
样品碱破坏：称取约10mg的阿司匹林于10ml容量瓶中，加入0.5ml的0.1M氢氧化钠溶液，室温放置10min，再加入0.5ml的0.1M盐酸溶液中和后，定容即得；
样品氧化破坏：称取约10mg的阿司匹林于10ml容量瓶中，加入1.0ml 10％H2O2，放置4h后，定容即得。
(2)色谱条件：
同实施例2
(3)测定：分别量取以上溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图9～11，数据见下表6。
表6原料药强制降解实验数据
名称
未破坏
0.1M HCL
0.1M NaOH
10％H2O2
称重(mg)
20.46
10.19
10.08
9.85
浓度(mg/ml)
1.023
1.019
1.008
0.985
杂质A(％)
/
/
/
/
杂质B(％)
/
/
/
/
杂质C(％)
0.023
7.526
11.715
5.492
杂质D(％)
0.044
0.038
0.016
0.041
杂质E(％)
/
/
0.028
/
杂质F(％)
/
/
/
/
ASPI(％)
99.934
92.437
88.241
94.394
主峰峰纯度
0.999999
0.999999
0.999999
0.999999
未知杂质个数
0
0
0
3
最大单杂(％)
0.044
7.526
11.715
5.492
最大未知单杂(％)
/
/
/
0.044
总峰面积
16324763
16652916
16886379
15675060
物料守恒(％)
/
102.41
104.98
99.72
(4)结果：从上表可知，阿司匹林经酸、碱、氧破坏后，主峰纯度均为0.999999，主要降解杂质为杂质C。在酸、氧化条件下，杂质C增加明显，无其他已知杂质增加，但氧化条件下，新增3个未知杂质；在碱性条件下，杂质C由0.023％增加至11.715％，杂质E由未检出增加至0.028％，无未知杂质产生。
在酸、碱、氧破坏条件下，各杂质与主峰之间的分离度均符合要求，且物料基本守恒，表明该方法能有效检出各降解杂质。
实施例9
阿司匹林肠溶片有关物质检测：
(1)溶液配制：
用乙腈作为空白溶液即稀释剂溶液；
分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品适量，分别加乙腈稀释成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各0.1mg的溶液，作为各杂质A、B、C、D、E、F储备液；
取阿司匹林原料药适量，加入杂质A、B、C、D、E、F的储备液适量，用稀释剂配制成每1ml中含阿司匹林1.0mg和杂质A、B、C、D、E、F各1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液；
取阿司匹林肠溶片粉末适量，加稀释剂在冰水浴中超声，定容为1mg/ml的溶液，离心取上清液作为供试品溶液；
取供试品溶液0.1ml于100ml容量瓶中，用稀释剂定容，作为0.1％自身对照溶液。
(2)色谱条件：
同实施例2
(3)测定：分别取以上溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱见图12，计算公式如下：
单个杂质％＝单个杂质峰面积/0.1％对照峰面积*0.1*100％；
总杂质％＝杂质峰面积之和/0.1％对照峰面积*0.1*100％。
结果见下表7。
表7样品检测结果
片剂
峰面积
检测结果(％)
0.1％自身对照
18902
/
RT＝11.959min
3214
0.017
RT＝21.917min(杂质C)
11302
0.060
RT＝22.517min
1146
0.006
RT＝25.235min
1002
0.005
RT＝26.079min
938
0.005
RT＝28.845min(杂质D)
7587
0.040
最大未知单杂(≤0.1％)
/
0.017
总峰面积
15874245
/
总杂(除杂质C)
25189
0.073
ASPI
15849056
99.867
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