心通颗粒的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种心通颗粒的质量检测方法，属于中药制剂分析领域。
背景技术
心通颗粒收载于国家部颁标准，由黄芪、党参、麦冬、何首乌、淫羊藿、葛根、当归、丹参、皂角刺、海藻、昆布、牡蛎、枳实十三味中药原料制成，具有益气活血，化痰通络之功效，用于气阴两虚、痰瘀痹阻所致的胸痹如冠心病、心绞痛，症见：心痛、胸闷、气短、呕恶、纳呆，临床效果显著。
目前，国家部颁标准YBZ16392009-2017中关于心通颗粒的现行检查项目主要有黄芪、何首乌、淫羊藿、丹参的薄层鉴别，葛根的含量测定(HPLC法测定葛根素)。中药复方制剂成分复杂，仅用薄层色谱法进行成分的定性鉴别，并采用超高效液相色谱法进行药效成分含量测定单一成分葛根素的含量测定，不足以全面反映心通颗粒的质量优劣。
超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量及色谱峰容量，具有简便准确、灵敏度高、重复性好、检测器种类多等特点，是构建制剂多种成分含量测定的重要方法之一。目前，尚未见有专利公开及文献报道采用UPLC法对心通颗粒7种成分含量测定的研究。本发明公开了UPLC法对心通颗粒的7种成分定量，对心通颗粒的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性与有效性。同时采用UPLC对心通颗粒剂中多组分进行同时测定，56min内完成7种成分的检测，试验结果体现了UPLC具有高分离效率，同时也节约了分析成本，减少了溶剂的使用量，更加环保，该试验建立的分离方法为心通颗粒质量标准的提升提供数据参考。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，是在国家部颁标准YBZ16392009-2017的基础上，进一步优化制剂检测方法，简化了操作方法，提高了检测效率。发明人通过长时间的探索和反复的试验，成功地将制剂中的葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA7种成分的UPLC含量测定合而为一，提供一种更加全面、准确的检测心通颗粒的新方法。
本发明的目的是提供一种治疗胸痹的中成药心通颗粒的质量检测方法，所述心通颗粒是由黄芪、党参、麦冬、何首乌、淫羊藿、葛根、当归、丹参、皂角刺、海藻、昆布、牡蛎、枳实十三味中药组方，经提取、纯化制成。其中，葛根素和大豆苷属于葛根中的成分，2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是何首乌中的成分，柚皮苷是枳实中成分，淫羊藿苷是淫羊藿中的成分，丹酚酸B和丹参酮ⅡA是丹参中的成分。
本发明采用UPLC同时测定制剂中的葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA的含量，实现对心通颗粒质量全面的评价和控制，从而为心通颗粒的真伪鉴别和内在质量优劣检测提供准确的依据。
一种心通颗粒质量检测方法，包括下列步骤：
A、供试品溶液的制备：取心通颗粒适量，研磨成细粉，精密称定1g，置于50ml容量瓶中，加入70-90％甲醇50ml，超声处理30min，冷却，用70-90％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
B、对照品溶液的制备：精密称取葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA对照品适量，置容量瓶中，加入70-90％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
C、UPLC色谱条件：以乙腈A-0.1％磷酸溶液B为流动相进行梯度洗脱；检测波长为250nm-320nm；进样量2μL；
D、测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，按照步骤C所述色谱条件测定，即得。
优选地，步骤A加入80％甲醇50ml，超声处理30min，冷却，用80％甲醇定容至刻度，摇匀。
优选地，步骤B精密称取葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA对照品适量，置容量瓶中，加入80％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
所述步骤C的波长切换程序为：
时间，min
检测波长，nm
0
250
15
320
23
283
36
270
56
270
波长切换，0-15min，250nm，检测葛根素和大豆苷，15-23min，320nm检测2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；23min-36min，283nm，检测柚皮苷和丹酚酸B；36min-56min，270nm，检测淫羊藿苷和丹参酮ⅡA。
优选地，所述步骤C流动相梯度含量和流速梯度变化洗脱条件为：
时间，min
流速，ml/min
流动相A，％
流动相B，％
0-27
0.5→0.3
5％→20％
95％→80％
27-40
0.3
20％→35％
80％→65％
40-45
0.3→0.5
35％→60％
65％→40％
45-55
0.5
60％
40％
55-56
0.5
60％→5％
40％→95％
。
与现有技术对比，本发明取得了以下有益技术效果：
1)本发明建立了心通颗粒升级版质量检测方法，采用UPLC定量同时测定制剂中葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA的7种成分含量，能够进一步有效控制心通颗粒的质量，实现对制剂质量进行全面地评价。
2)本发明首次通过梯度洗脱程序并联合波长切换法，成功地将制剂中的葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷及丹参酮ⅡA这7种成分的UPLC含量测定合而为一，提供了一种更加全面、准确的检测心通颗粒的新方法。
3)本发明通过一测多评同时检测心通颗粒中的7种成分，实现了多个成分的同步测定，简化了操作方法，提高了检测效率，并且节约了耗材，节省了人工成本，提供了更加迅速便捷、节能环保的检测方法。
4)与现有心通颗粒的质量检测方法相比，本发明方法具有快速，灵敏，重复性好等优点，能准确测定心通颗粒中7种成分，专属性强、重现性好，能全面有效地控制心通颗粒的质量，有利于稳定产品的质量，确保临床用药安全性和有效性，同时更好地满足医疗和市场的需要。
附图说明
图1为对照品UPLC色谱图，色谱峰从左到右依次为葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA；
图2为供试品UPLC色谱图；
图3为缺葛根阴性对照UPLC色谱图；
图4为缺何首乌阴性对照UPLC色谱图；
图5为缺枳实阴性对照UPLC色谱图；
图6为缺丹参阴性对照UPLC色谱图；
图7为缺淫羊藿阴性对照UPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
实施例1心通颗粒7种成分的UPLC测定方法学研究
1药品与试剂
1.1药品与试剂：葛根素对照品(批号：110752-201816，纯度以95.4％计)、大豆苷对照品(批号：111738-201904，纯度以93.4％计)、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(批号：110844-201814，纯度以91.0％计)、柚皮苷对照品(批号：110722-201815，纯度以91.7％计)、丹酚酸B对照品(批号：111562-201917，纯度以96.6％计)、淫羊藿苷(批号：110737-201516，纯度以94.2％计)、丹参酮ⅡA对照品(批号：110766-202022，纯度以98.9％计)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水自制，乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，样品批号见表1。
表1心通颗粒测试样品批号
2仪器：Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)：2998PDA检测器。
3色谱条件：色谱柱：C18色谱柱(4.6x50 mm，2.7μm)；以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.1％磷酸水溶液为流动相B，柱温：30℃；进样体积：2μl；
表2流动相梯度含量及流速变化：
时间(min)
流速(ml/min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0-27
0.5→0.3
5％→20％
95％→80％
27-40
0.3
20％→35％
80％→65％
40-45
0.3→0.5
35％→60％
65％→40％
45-55
0.5
60％
40％
55-56
0.5
60％→5％
40％→95％
表3波长切换程序
时间(min)
检测波长(nm)
0
250
15
320
23
283
36
270
56
270
4溶液制备
4.1供试品溶液的制备
取心通颗粒适量，研细，取约1g，精密称定，置50ml容量瓶中，加80％甲醇50ml适量，超声处理30min，冷却，用80％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
4.2对照品溶液的制备
精密称取葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成每1mL含172.16μg、41.64μg、7.38μg、11.84μg、72.88μg、9.28μg、3.12μg的混合溶液，即得。
4.3阴性对照溶液的制备
分别取不含葛根药材的阴性对照、不含何首乌药材的阴性对照、不含枳实药材的阴性对照、不含丹参药材的阴性对照、不含淫羊藿的阴性对照，照供试品溶液的制备项下同法操作，制成阴性对照溶液，从色谱图可以看出，在葛根素、大豆苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA位置处无干扰，见图1-图7。
5线性关系考察
精密称取对照品适量，加80％甲醇配成下列浓度，在上述色谱条件下进行测定，分别进样2μL，测定峰面积。结果见表4、5、6、7、8、9、10。
表4葛根素线性关系考察结果
表5大豆苷线性关系考察结果
表6 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷线性关系考察结果
表7柚皮苷线性关系考察结果
表8丹酚酸B线性关系考察结果
表9淫羊藿苷线性关系考察结果
表10丹参酮ⅡA线性关系考察结果
葛根素测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝23156.0534X-114200.6219，r＝0.99990，即柚葛根素皮苷浓度在43.04～430.40ug/mL范围内线性良好。
大豆苷测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝20444.8573X-13371.4329，r＝0.99995，即大豆苷浓度在6.94～69.40μg/mL范围内线性良好。
2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝49621.7480X-38470.6000，r＝0.99986，即2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷浓度在2.46～24.60μg/mL范围内线性良好。
柚皮苷测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝12748.3939X-6586.7757，r＝0.99979，即柚皮苷浓度在2.96～29.6μg/mL范围内线性良好。
丹酚酸B测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝8413.9412X-29594.4274，r＝0.99992，即新橙皮苷浓度在18.22～182.20μg/mL范围内线性良好。
淫羊藿苷测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝16237.8413X-7986.2575，r＝0.99992，即芦荟苷浓度在2.32～23.20μg/mL范围内线性良好。
丹参酮ⅡA测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝25382.8899X-3052.5616，r＝0.99998，即芦荟苷浓度在1.04～10.40μg/mL范围内线性良好。
6精密度试验
精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次2μL，峰面积RSD<2％，表明仪器精密度良好。结果见表11。
表11精密度试验结果
7稳定性试验
取同一样品溶液，分别于配制后0，2，4，6，8，12，16，20，24h测定，结果表明样品在24h内稳定。结果见表12。
表12稳定性试验结果
8重复性试验
分别取同一批号(07015001)的样品6份，照“样品测定”项下的样品制备方法操作，分别测定，计算含量。结果见表13、14、15、16、17、18、19。
表13葛根素重复性试验结果
表14大豆苷重复性试验结果
表15 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷重复性试验结果
表16柚皮苷重复性试验结果
表17丹酚酸B复性试验结果
表18淫羊藿苷重复性试验结果
表19丹参酮ⅡA重复性试验结果
9回收率试验
精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入0.8608mg/ml的葛根素对照品溶液5ml，0.1388mg/ml的大豆苷对照品溶液8ml，0.0492mg/ml的2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液4mL、0.0592mg/ml的柚皮苷对照品溶液6ml、0.3644mg/ml的丹酚酸B4.5 ml，0.0464mg/ml的淫羊藿苷5ml，0.0208mg/ml的丹参酮ⅡA对照品溶液4ml，同“供试品溶液的制备”项下的制备方法测定。结果见表20、21、22、23、24、25、26。
表20葛根素回收率试验结果
表21大豆苷回收率试验结果
表22 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷回收率试验结果
表23柚皮苷回收率试验结果
表24丹酚酸B回收率试验结果
表25淫羊藿苷回收率试验结果
表26丹参酮ⅡA回收率试验结果
10 24批心通颗粒中7种成分含量测定结果如下见表27
表27 24批心通颗粒中7种成分含量
实施例2心通颗粒7种成分的UPLC测定
A、供试品溶液的制备：取心通颗粒适量，研磨成细粉，精密称定1g，置于50ml容量瓶中，加入70％甲醇50ml，超声处理30min，冷却，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
B、对照品溶液的制备：精密称取葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA对照品适量，置容量瓶中，加入70％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
C、UPLC色谱条件：以乙腈A-0.1％磷酸溶液B为流动相进行梯度洗脱；检测波长为250nm-320nm；进样量2μL；流动相梯度含量、流速变化及波长切换程序如下表所示：
时间(min)
检测波长(nm)
0
250
15
320
23
283
36
270
56
270
D、测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，按照步骤C所述色谱条件测定，即得。
实施例3心通颗粒7种成分的UPLC测定
A、供试品溶液的制备：取心通颗粒适量，研磨成细粉，精密称定1g，置于50ml容量瓶中，加入90％甲醇50ml，超声处理30min，冷却，用90％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
B、对照品溶液的制备：精密称取葛根素、大豆苷、2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹参酮ⅡA对照品适量，置容量瓶中，加入90％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
C、UPLC色谱条件：以乙腈A-0.1％磷酸溶液B为流动相进行梯度洗脱；检测波长为250nm-320nm；进样量2μL；流动相梯度含量、流速变化及波长切换程序如下表所示：
时间(min)
流速(ml/min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0-27
0.5→0.3
5％→20％
95％→80％
27-40
0.3
20％→35％
80％→65％
40-45
0.3→0.5
35％→60％
65％→40％
45-55
0.5
60％
40％
55-56
0.5
60％→5％
40％→95％
D、测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，按照步骤C所述色谱条件测定，即得。
- 上一篇：石墨接头机器人自动装卡簧、装栓机
- 下一篇：一种阿司匹林有关物质的检测方法
