一种同时测定口腔清洁护理产品中10种季铵盐类杀菌剂的方法
技术领域
本发明涉及化工产品检测领域，特别是涉及化妆品类检测领域，更为具体的说是涉及同时测定口腔清洁护理产品中10种季铵盐类杀菌剂的方法。
背景技术
季铵盐类杀菌剂是一种阳离子表面活性剂类的广谱性杀菌剂，具有高效的杀菌能力、渗透能力强以及毒性低等特点。1915年，Jacobs W首次合成出季铵盐类化合物，并发现此类化合物具有一定的杀菌能力。季铵盐类杀菌剂对酵母菌、真菌、革兰氏阳性菌和阴性菌、以及滴虫、原虫等均具有较好的抑制杀菌作用。因此，季铵盐类化合物作为一种抑菌剂在口腔清洁护理产品中被应用。
但是，过量使用季铵盐类杀菌剂会引起变态反应性结膜炎，视力减退，接触性皮炎，灼伤中毒，甚至死亡。Franklin发现同类季铵盐烷基链短的毒性比烷基链长的大，烷基链长度相同时，带甲基的比带苄基的毒性大，带甲基的比单烷基的毒性大，单烷基的比双烷基的毒性大。
因此，必须对牙膏、漱口水等口腔清洁护理产品中所含的季铵盐类杀菌剂进行监管，从而保证这些产品的安全性。根据2020年6月16日国务院公布的《化妆品监督管理条例》，牙膏等产品参照普通化妆品的规定进行管理。按照相关的《化妆品安全技术规范》(2015版)和欧盟化妆品规程(Council Directive 76/768/EEC)中规定十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵和十八烷基二甲基苄基氯化铵总量不得超过0.1％(以苯扎氯铵计)，并且对于驻留类产品，十二烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十八烷基三甲基氯化铵和二十二烷基三甲基氯化铵的使用量不大于0.25％。
因此，如何能够快速对以牙膏为主要代表的口腔清洁产品中的季铵盐类杀菌剂进行定性定量分析，从而为相关产品的安全监管提供可靠数据，保障消费者使用安全，成为本领域技术人员研究的热点。
由于这些待检测化合物结构相近、性质类似，因此存在不易分离的难题；同时牙膏中含有增稠剂等辅料，存在有效提取难，检测中容易堵塞、损坏高精度试验仪器的问题。
因此，对牙膏等样品进行有效的前处理，避免其在后续检测分析中损坏仪器，同时有效分离产品中10种季铵盐类杀菌剂成为本领域技术人员需要攻克的技术难点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是开发一种同时测定口腔清洁护理产品中10种季铵盐类杀菌剂的方法，从而能够准确提取、快速测定产品中所含的十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵、十八烷基三甲基氯化铵、十八烷基二甲基苄基氯化铵、二十二烷基三甲基氯化铵的含量。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种同时测定口腔清洁护理产品中10中季铵盐类杀菌剂的方法，所述方法为高效液相色谱仪-蒸发光散射检测仪联用的检测方法，其中高效液相色谱仪采用表面活性剂柱，流动相为混合相，由A：50mmol/L乙酸铵水溶液(pH＝5.5)和B：乙腈组成，采用梯度洗脱的方式，梯度洗脱程序为：0.0～5.0min，75％A～35％A，5.0～15.0min，35％A～20％A，15.0～20.0min，20％A，20.0～21.0min，20％A～75％A，21.0～25.0min，75％A，其中流动相比例的变化为匀速渐变；
也就是说，流动相各时间点的流动相组成比例如表1中所示：
表1：
且表中所示出的变化均为匀速变化；
同时，蒸发光散射检测仪的检测条件为：蒸发温度为40℃，雾化器温度为40℃，雾化气体为氮气，载气流速：1.5SLM。
进一步优选地，在本发明中还公开了所述流动相的流速为1.0mL/min，分析时间为25min。
进一步优选地，所述进样量为10μL。
进一步优选地，所述色谱柱的柱温为30℃。
在一个优选的技术方案中，还公开了牙膏样品的前处理方法，具体包括以下步骤，将待测牙膏样品与无水硫酸钠混合均匀后，加入甲醇，超声提取，离心后，取上清液作为供试品。
本发明通过对牙膏样品的前处理，可以去除增稠剂等对检测器有害的辅料，同时不影响牙膏中季铵盐类杀菌剂待检测成分的提取，不仅能够保护昂贵的检测仪器免受损害，同时可以保证待检测成分提取的准确度，更好的反应产品中杀菌剂成分的含量。
进一步优选地，所述牙膏样品与无水硫酸钠的混合比例为1:5。
进一步优选地，在本发明中还公开了漱口水的供试品制备方法，包括以下步骤，将待测的漱口水样品溶解于甲醇中，混匀，得到供试品。
采用本发明公开的技术方案后，能够将口腔清洁护理产品(牙膏、漱口水)中所含的10中季铵盐类杀菌剂的成分分离开来，并通过蒸发光散射检测器定量其含量，是一种快速、有效的定性定量测定方法。经验证，本发明公开的检测方法在(50～500)mg/kg的添加水平范围内，牙膏样品和漱口水样品中十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵和十八烷基三甲基氯化铵的平均回收率为87.9％～103.1％，RSD值均小于4.9％。在(100～1000)mg/kg的添加水平范围内，牙膏样品和漱口水样品中十八烷基二甲基苄基氯化铵和二十二烷基三甲基氯化铵的平均回收率为90.3％～96.4％，RSD值均小于5.5％。本发明公开的检测方法的回收率和精密度数据均符合残留物分析技术指标，方法准确。
附图说明
图1为添加有10种季铵盐类杀菌剂标准品的高效液相色谱图。
图2为牙膏样品色谱图。
图3为漱口水样品色谱图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面我们结合具体的实施例对本发明进行进一步的阐述。
实施例1定量曲线的制作
混合标准工作液的制备：
分别准确称取一定量的10种季铵盐类杀菌剂标准品，分别用甲醇溶解并定容至10mL，配制成质量浓度均为10000mg/L的单一标准储备液，分别移取一定体积上述单一标准储备液，配制成混合标准工作液(十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵和十八烷基三甲基氯化铵浓度为200mg/L，十八烷基二甲基苄基氯化铵和二十二烷基三甲基氯化铵浓度为400mg/L)。
将混合标准工作液逐级稀释成系列标准工作液，按照以下仪器条件进行测定：
色谱柱：Acclaim Surfactant(5μm，4.6mm×150mm，美国Thermo公司)；流动相：A-50mmol/L乙酸铵水溶液(pH＝5.5)，B-乙腈，梯度洗脱程序：0.0～5.0min，75％A～35％A，5.0～15.0min，35％A～20％A，15.0～20.0min，20％A，20.0～21.0min，20％A～75％A，21.0～25.0min，75％A；色谱柱温度：30℃；进样量为10μL；流动相流速为1.0mL/min；分析时间为25min；蒸发光散射检测器，蒸发温度为40℃，雾化器温度为40℃，雾化气体为氮气，载气流速：1.5SLM。
采用外标法定量，以各分析物的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，建立标准曲线，得到季铵盐类杀菌剂的线性回归方程，以10倍信噪比(S/N＝10)计算仪器的定量限(LOQ)，结果如表2和图1所示，其中图1中编号与表2中序号一一对应。
表2：10种季铵盐类杀菌剂的保留时间和线性方程
实施例2回收率及精密度验证
分别以阴性的牙膏样品和漱口水样品为样本，按照本试验条件，采用加标法进行回收率和精密度试验，作三个添加水平，每个添加水平作6次平行。
表3阴性样品中10种季铵盐类杀菌剂的加标回收率和相对标准偏差(n＝6)
经过计算，在(50～500)mg/kg的添加水平范围内，牙膏样品和漱口水样品中十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵和十八烷基三甲基氯化铵的平均回收率为87.9％～103.1％，RSD值均不大于4.9％。在(100～1000)mg/kg的添加水平范围内，牙膏样品和漱口水样品中十八烷基二甲基苄基氯化铵和二十二烷基三甲基氯化铵的平均回收率为90.3％～96.4％，RSD值均不大于5.5％。
实施例3牙膏样品的检测
样品前处理
称取1.0g(精确至0.01g)样品于50mL离心管中，加入5g无水硫酸钠搅拌混匀后，加入10mL甲醇，常温超声提取5min后，用离心机离心3min，取部分上清液经有机相针式过滤头过滤到进样瓶，作为供试品。
仪器分析条件
色谱柱：Acclaim Surfactant(5μm，4.6mm×150mm，美国Thermo公司)；流动相：A-50mmol/L乙酸铵水溶液(pH＝5.5)，B-乙腈，梯度洗脱程序：0.0～5.0min，75％A～35％A，5.0～15.0min，35％A～20％A，15.0～20.0min，20％A，20.0～21.0min，20％A～75％A，21.0～25.0min，75％A；色谱柱温度：30℃；进样量为10μL；流动相流速为1.0mL/min；分析时间为25min；蒸发光散射检测器，蒸发温度为40℃，雾化器温度为40℃，雾化气体为氮气，载气流速：1.5SLM。
检测结果如图2所示，在9.850min处具有色谱峰，其面积统计为579.9。结合表2公开的标准数据，我们可以得出该待测样品中含有十八烷基二甲基苄基氯化铵，且其含量为1511mg/kg的结果。
实施例4漱口水样品的检测
样品前处理
称取1.0g(精确至0.01g)样品于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，取部分样品经有机相针式过滤头过滤到进样瓶，作为供试品。
仪器分析条件
色谱柱：Acclaim Surfactant(5μm，4.6mm×150mm，美国Thermo公司)；流动相：A-50mmol/L乙酸铵水溶液(pH＝5.5)，B-乙腈，梯度洗脱程序：0.0～5.0min，75％A～35％A，5.0～15.0min，35％A～20％A，15.0～20.0min，20％A，20.0～21.0min，20％A～75％A，21.0～25.0min，75％A；色谱柱温度：30℃；进样量为10μL；流动相流速为1.0mL/min；分析时间为25min；蒸发光散射检测器，蒸发温度为40℃，雾化器温度为40℃，雾化气体为氮气，载气流速：1.5SLM。
检测结果如图3所示，在8.498min处具有色谱峰，其面积统计为262.8。结合表2公开的标准数据，我们可以得出该待测样品中含有十六烷基二甲基苄基氯化铵，且其含量为202mg/kg的结果。
以上所述是本发明的具体实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
