一种鉴别天然植物抗菌促生长饲料添加剂中菊苣酸、甘草苷和姜黄素的方法
技术领域
本发明涉及薄层色谱检测
技术领域
，具体涉及一种鉴别天然植物抗菌促生长饲料添加剂中菊苣酸、甘草苷和姜黄素的方法。背景技术
天然植物抗菌促生长饲料添加剂(ZL201410834689.8)，对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌)、革兰氏阴性菌(大肠杆菌、沙门氏菌等)，均具有很好的杀灭作用，集抑菌杀菌与抗病毒、提高免疫与抗病力作用于身，可全部替代饲用抗生素，绿色环保，成本适中，生产方法简便、易操作。
为规范市场销售、便于消费者对产品进行快速鉴别，需要一种简便快速鉴别天然植物抗菌促生长饲料添加剂(ZL201410834689.8)的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速高效鉴别天然植物抗菌促生长饲料添加剂真伪的方法。
本发明所针对的天然植物抗菌促生长饲料添加剂的颗粒剂型由如下重量份的原料制得：黄芪提取物120份、杜仲提取物100份、金银花提取物120份、黄连提取物110份、肉桂提取物100份、姜黄提取物70份、苦木提取物80份、蒲公英提取物90份、芦荟提取物60份、肉豆蔻提取物60份、甘草提取物90份，粘结剂10份，水10份。
在对天然植物抗菌促生长饲料添加剂中的菊苣酸、甘草苷和姜黄素进行薄层色谱鉴别时，由于天然植物抗菌促生长饲料添加剂的组分复杂，且菊苣酸、甘草苷和姜黄素的性质各不相同，在鉴别过程中，需要克服的困难有：对照品不显色、供试品或对照品溶液展开不完全、斑点不够舒展等等。
本发明首次确定了对天然植物抗菌促生长饲料添加剂中的菊苣酸、甘草苷和姜黄素进行薄层色谱鉴别的方法，包括：所用展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水的下层溶液，所用展距为14-17cm；供试品溶液是供试品在27-35℃下，80％甲醇溶液中超声处理得到的；所述三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水的比例为12∶24∶5∶4或12∶24∶7∶4。
在本发明所提供的方法中，菊苣酸对照品溶液为，每1mL的80％甲醇含0.1-0.3mg菊苣酸；甘草苷对照品溶液为，每1mL的70％乙醇含0.4-0.6mg甘草苷；姜黄素对照品溶液为，每1mL的无水乙醇中含0.4-0.6mg的姜黄素。
在本发明提供的方法中，显色方式为紫外365nm下检视或喷以10％硫酸乙醇溶液，加热烘干至斑点显色清晰，日光下检视。
具体地，对天然植物抗菌促生长饲料添加剂中的菊苣酸、甘草苷和姜黄素进行薄层色谱鉴别的方法，包括：
(1)使用80％甲醇在30℃下，溶解待测样品得到供试品溶液；
(2)菊苣酸对照品溶液的溶剂为80％乙醇；甘草苷对照品溶液的溶剂为70％乙醇；姜黄素对照品溶液的溶剂为无水乙醇；
(3)将配制完成的供试品溶液、对照品溶液，依次点样于同一薄层板的同一水平线的不同位置上，然后将薄层板置于展开剂中，上行展开，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶7∶4)，展距17cm；
(4)展开完成后，取出薄层板，365nm紫外灯下检视或喷以显色剂，加热晾干在日光下检视。
其中，在步骤(2)中，菊苣酸对照品溶液的浓度为0.2mg/mL；甘草苷对照品溶液的溶剂的浓度为0.5mg/mL；姜黄素对照品溶液的浓度为0.5mg/mL。
本发明还要求保护一种鉴别甘草苷的薄层色谱方法，甘草苷对照品溶液使用70％乙醇制备，甘草苷对照品溶液浓度为0.5mg/mL，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶7∶4)，显色剂为10％硫酸乙醇溶液，喷施显色剂后，加热烘干至斑点显色清晰，日光下检视。
以及，一种鉴别菊苣酸的薄层色谱方法，菊苣酸对照品溶液使用无水乙醇制备，菊苣酸对照品溶液浓度为0.5mg/mL，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶7∶4)，365nm紫外灯下检视。
以及，一种鉴别姜黄素的薄层色谱方法，姜黄素对照品溶液使用80％乙醇制备，姜黄素对照品溶液浓度为0.2mg/mL，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶7∶4)，365nm紫外灯下检视或10％硫酸乙醇溶液喷施后，加热烘干至斑点显色清晰，日光下检视。
根据本领域技术人员的理解，本发明还要求保护上述的方法或上述的薄层色谱方法，在天然植物抗菌促生长饲料添加剂防伪检测中的应用。
本发明的有益效果至少在于：
(1)本发明提供的方法，意外发现在30℃水浴进行供试品溶液制备时，供试品在薄层板上展开剂显色的效果更好，色谱清晰、分离效果好，杂带少；
(2)本发明确定了对天然植物抗菌促生长饲料添加剂中的菊苣酸、甘草苷和姜黄素进行薄层色谱鉴别的最佳展开剂及对照品溶液浓度；
(3)采用本发明提供的方法，可高效便捷检测所述天然植物抗菌促生长饲料添加剂中的菊苣酸、甘草苷和姜黄素，起到规范市场销售、便于消费者对产品进行快速鉴别。
附图说明
图1为本发明实施例1中菊苣酸与姜黄素在365nm紫外灯下的薄层色谱显色图。
图2为本发明实施例1中甘草苷与姜黄素在日光下的薄层色谱显色图。
图3为本发明实施例2中菊苣酸与姜黄素在365nm紫外灯下的薄层色谱显色图。
图4为本发明实施例2中甘草苷与姜黄素在日光下的薄层色谱显色图。
图5为本发明对比例1的薄层色谱图。
图6为本发明对比例2的薄层色谱图。
具体实施方式
以下实例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的保护范围。
若未特别指明，本发明实例中所用的实验材料、试剂、仪器等均可市售获得；若未具体指明，本发明实例中所有的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
本实施例检测对象：ZL201410834689.8实施例1中制备的饲料添加剂。本实施例使用的对照品为菊苣酸、甘草苷、姜黄素，本实施例中薄层色谱鉴别方法，步骤如下：
1、供试品溶液的制备：取爱绿舒产品1g，加80％甲醇20mL溶解，水温30℃，超声(60W，80Hz)处理20min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：
取菊苣酸对照品，加80％甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液；
取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液；
取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液。
3、点样：薄层板：硅胶G板；
点样顺序为，供试品、菊苣酸、甘草苷、姜黄素；
点样量：10μL、10μL、10μL、10μL。
4、展开：方式为上行展开；
展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶7∶4)下层溶液；
展距：17cm。
5、显色：取出，晾干，置紫外365nm下检视；之后喷以10％硫酸乙醇试液，置105℃烘箱至斑点显色清晰，日光下检视。
实验结果如图1、图2所示，供试品色谱条带清晰，且供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
实施例2
本实施例检测对象：ZL201410834689.8实施例1中制备的饲料添加剂。本实施例使用的对照品为菊苣酸、甘草苷、姜黄素，本实施例中薄层色谱鉴别方法，步骤如下：
1、供试品溶液的制备：取爱绿舒产品1g，加80％甲醇10mL溶解，水温30℃，超声(60W，80Hz)处理20min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：
取菊苣酸对照品，加80％甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液；
取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液；
取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液。
3、点样：薄层板：硅胶G板；
点样顺序为，供试品、菊苣酸、甘草苷、姜黄素；
点样量：10μL、10μL、10μL、10μL。
4、展开：方式为上行展开；
展距：14cm；
展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶5∶4)下层溶液。
5、显色：取出，晾干，置紫外365nm下检视；之后喷以10％硫酸乙醇试液，置105℃烘箱至斑点显色清晰，日光下检视。见图3、图4。
图3、图4结果证实菊苣酸、姜黄素置紫外365nm下检视，显色清晰，与爱绿舒样品在同一位置显相同颜色斑点；甘草苷、姜黄素使用10％硫酸乙醇液喷剂，置105℃烘箱至斑点清晰，日光下检视置，显色清晰，且与爱绿舒样品在同一位置显相同颜色斑点。
对比例1
本对比例检测对象：ZL201410834689.8实施例1中制备的饲料添加剂。本实施例使用的对照品为菊苣酸、甘草苷、姜黄素，本实施例中薄层色谱鉴别方法，步骤如下：
1、供试品溶液的制备：取爱绿舒产品1g，加甲醇20mL溶解，水温60℃，超声(45W，80Hz)处理20min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：
取菊苣酸对照品，加80％甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液；
取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含20μg的溶液；
取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液。
3、点样：薄层板：硅胶G板；
点样顺序为供试品、菊苣酸、甘草苷、姜黄素；
点样量：10μL、10μL、20μL、10μL。
4、展开：方式为上行展开；
展距：17cm；
展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(40∶20∶0.9∶8)下层溶液。
5、显色：取出，晾干，置紫外365nm下检视。见图5。
本对比例的实验结果显示，①菊苣酸斑点与爱绿舒样品相应位置斑点不一致；②甘草苷不显点。
推测原因是在(1)进行供试品溶解时，采用水温60℃太高及甲醇浓度不合适，导致供试品溶解不充分，造成供试品在薄层板上分散不完全；(2)展开剂体系不合适；(3)显色方法不合适；(4)甘草苷对照品溶液浓度不合适。
对比例2
本对比例检测对象：ZL201410834689.8实施例1中制备的饲料添加剂。本实施例使用的对照品为菊苣酸、甘草苷、姜黄素，本实施例中薄层色谱鉴别方法，步骤如下：
1、供试品溶液的制备：取爱绿舒产品1g，加80％甲醇10mL溶解，水温30℃，超声(60W，80Hz)处理20min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：
取菊苣酸对照品，加80％甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液；
取甘草苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含20μg的溶液；
取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液。
3、点样：
薄层板：硅胶G板；
点样顺序为，供试品、菊苣酸、甘草苷、姜黄素；
点样量：10μL、10μL、20μL、10μL。
4、展开：方式为上行展开；
展距：16cm；
展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水(12∶24∶5∶4)下层溶液。
5、显色：取出，晾干，置紫外365nm下检视。色谱识别：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
相对于对比例1，本次供试品制备的溶剂由纯甲醇20ml调整到80％甲醇10ml；超声功率从45W增大到60W；水温从60℃降低为30℃。图6实验结果显示，供试品展开的图谱清晰，但甘草苷不显色，需要改变检视方法或改变甘草苷对照品的浓度。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
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