一种封片新方法
技术领域
本发明属于生物
技术领域
，具体涉及一种载玻片表面封固新方法。背景技术
在医学检测领域，将细胞成分或组织切片转移至载玻片上，经染色等处理后，进行显微镜观察，是重要的检测手段之一，应用十分广泛。为防止样本暴露在空气中氧化变色，或防止外来污染，使样本片子能够长久保存，需要将载玻片有样本的区域，用合适的方法封固起来，此过程称为封片。
目前常用的封片方法，是使用有机溶剂如乙醇、二甲苯等对载玻片的样本区域进行脱水、脱乙醇等步骤，然后滴加中性树胶或封片胶，再贴附盖玻片来进行封片。待胶固化后，即形成了两面为玻璃中间为透明封固层的三明治结构，最终将样本封固在了固化的胶内。上述传统方法虽然应用广泛，但不足之处十分明显。首先，操作步骤繁琐，需消耗大量时间；“脱水”需要至少2次或更多次才能完成，将片子浸泡在二甲苯中进行脱醇，时间很长。其次，在封片过程中需要使用乙醇、二甲苯等有机溶剂进行脱水、脱醇处理，污染环境；最后，固化时间较长，至少几个小时甚至几天。中性树胶自然干透固化，至少36小时，即使用烤箱烘干，也至少2小时。
而使用乙醇、二甲苯这样的危险品和高度类似试剂，完全是为了迎合中性树胶的使用，而不是为了染色本身。由于细胞内部75％都是水，因此，染色液必然是水溶性的，才能够进入细胞进行染色。这就决定了染色液的基质必然是水或可与水互溶的溶剂，通常使用甲醇或乙醇等。中性树胶是由加拿大树胶用二甲苯稀释而配制成的，与水不互溶。因此，要想使用中性树胶进行最后的封固，必须要将染色后的细胞内部液体，全部置换成二甲苯，或者可与二甲苯互溶的溶剂，否则，会因为不互溶而出现雾状甚至牛奶状的后果，导致无法看清细胞。只要找到合适的中性树胶替代品，即可省略乙醇及二甲苯等有机溶剂的使用。
因此，如何提供一种绿色环保、高效快捷的封片新方法是研究人员迫切需要解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种封片新方法，以解决现有封片方法步骤繁琐、耗时长及污染环境等问题。
为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种水性UV固化树脂在封片中的应用。
其中，本发明所述水性UV固化树脂为在UV固化树脂的基础上引入了水性基团或链段，使树脂具有一定的亲水性和吸水性。
优选的，所述水性UV固化树脂为不饱和聚酯类树脂、聚氨酯丙烯酸酯或环氧丙烯酸酯。
本发明还提供了一种封片方法，样本用水性UV固化树脂封片，紫外光照射固化。
优选的，所述样本为细胞成分或组织切片。
优选的，所述样本为染色样本或非染色样本。
优选的，所述样本染色后用清水冲洗。
优选的，所述紫外光的波长为315-400nm。
优选的，所述紫外光照射时间为10秒-1分钟。
优选的，所述紫外光源与玻片的距离小于10cm。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明利用水性UV固化树脂来替代中性树胶进行封片。水性UV固化树脂是成熟的工业产品，生产企业众多，原料易得，无需使用者自己费时配制，有利于大规模采购和推广。
本发明水性UV固化树脂因为内含紫外线光固化引物，因此，只要使用一定强度的紫外光近距离照射，在10秒-1分钟内，即可固化成坚固的透明树脂层。其折光率和封固强度，与中性树胶固化的效果一致，甚至优于中性树胶。
经固化后的样本，背景明亮清澈，细胞核结构清晰，细胞膜边界对比度高，色彩无失真现象，染色液无被溶解晕染情况；与中性树胶的封片效果相同，但背景明显更加明亮，透光度方面优于中性树胶。
本发明完全取消了乙醇、二甲苯等危险品及高毒性试剂，操作步骤比传统方法至少省略了50％，固化时间缩短到传统的方法的千分之一。整个流程高效快捷，绿色环保，质量提升。
附图说明
具体实施方式
本发明提供了一种水性UV固化树脂在封片中的应用。本发明中所述水性UV固化树脂为在UV固化树脂的基础上引入了水性基团或链段，使树脂具有一定的亲水性和吸水性。常见的水性UV固化树脂的合成方法有两种：一种是在传统树脂的分子链上引入亲水性基团，如UP(不饱和聚酯类树脂)；另一种是与丙烯酸酯反应生成水性丙烯酸酯类低聚物，如PUA(聚氨酯丙烯酸酯)、EA(环氧丙烯酸酯)等。水性UV固化树脂作为一种新型、环保和节能型树脂，具有无溶剂臭味、无毒、无污染、操作方便、残胶易清理、固含量高和储运安全方便等优点，是环保节能型UV固化树脂的发展方向，其各项性能均优于传统的UV固化树脂。本发明可以采取以上水性UV固化树脂类型的任意一种。
本发明提供了一种封片方法，样本用水性UV固化树脂封片，紫外光照射固化。水性UV固化树脂可以与水互溶，也可以用少量水稀释，流动性与中性树胶一致。本发明中，直接在样本区域滴几滴水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，水性UV树脂就会弥散在载玻片和盖玻片之间，完成封片。由于水性UV固化树脂内含紫外线光固化引物，因此，只需一定强度的紫外光近距离照射，即可固化成坚固的透明树脂层。本发明中，紫外光的波长优选为315-400nm，更优选为365nm-395nm，可根据生产企业的具体要求灵活选用相应波长；紫外光照射时间为10秒-1分钟，优选为30秒，固化时间短；紫外光源与玻片的距离小于10cm，优选为8cm，以保证固化效果。
本发明中，样本优选为经过染色后的细胞成分或组织切片。本发明对染色方法没有特殊限定，采用本领域所熟知的染色方法即可。样本染色后用清水冲洗，清洗掉多余的染色液。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将经过染色清洗后的细胞样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯8nm处，于315nm波长下照射10秒，完成固化。
实施例2
将经过染色清洗后的组织切片样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯5nm处，于400nm波长下照射30秒，完成固化。
实施例3
将经过染色清洗后的组织切片样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯9nm处，于395nm波长下照射40秒，完成固化。
实施例4
将实施例1中的固化样本在390-600nm的测试波长下，折光率可以达到1.6-2.0，与载玻片1.5-3.3的折光率非常一致。
实施例5
取同一宫颈细胞样本，平均制成两张细胞涂片，同时用苏木素-伊红染色，同时分别用水性UV树脂和中性树胶进行封片，采用水性UV树脂封片固化方法同实施例1，采用中性树脂封片自然干透固化，然后用显微镜在40倍物镜下观察。
具体地，两种封片方法流程如下：
通用步骤：
带有宫颈细胞的载玻片在95％乙醇中浸泡10分钟进行固定，然后用苏木素染液浸泡2分钟，取出用清水洗干净，放入1％盐酸酒精2秒进行分化，然后流水清洗干净，放入伊红染液浸泡10秒，流水漂洗干净。
接下来是两种封片方法各自流程：
1)本发明方法：直接滴加2滴水性UV固化树脂，用盖玻片覆盖并轻轻压紧，然后，将封好的片子放在距离紫外灯8nm处，于315nm波长下照射10秒，完成固化。
2)中性树胶方法：将载玻片放入75％乙醇浸泡1分钟，然后放入85％乙醇浸泡1分钟，放入95％乙醇浸泡1分钟，放入无水乙醇浸泡1分钟，再放入第二道无水乙醇浸泡1分钟，接下来，放入第一道二甲苯中浸泡1分钟，再放入第二道二甲苯中浸泡1分钟，接着放入第三道二甲苯中浸泡1分钟。最后，滴加2滴中性树胶，用盖玻片覆盖并轻轻压紧，自然晾干或烘箱烘干。
结果发现，采用水性UV树脂固化后，背景明亮清澈，细胞核结构清晰，细胞膜边界对比度高，色彩无失真现象，染色液无被溶解晕染情况。与中性树胶的封片效果相同，但背景明显更加明亮，在感官方面，透光度方面优于中性树胶。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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