具体实施方式

本发明提供了一种改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备方法，包括以下步骤：

将人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子经过乙醇提取后进行浓缩，得到改善卷烟香气品质的中草药组合物。

本发明以人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子为原料进行中草药组合物的制备。

所述中草药组合物，由包括以下质量份的中草药制备而成：1～4质量份的人参；1～2质量份的石菖蒲；1～2质量份的蜜百部；1质量份的苍耳子。

本发明提供的改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备原料包括1～4质量份的人参，优选为1、2、3、4，或1～4质量份之间的任意值。中药人参味甘、微苦，性温、平。归脾、肺经、心经。具有补气，固脱，生津，安神，益智之功效。人参醇提物具有参香味，入口先苦后甘，有生津、补肺、健脾作用。

本发明提供的改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备原料还包括1～2质量份的石菖蒲，优选为1～2质量份之间的任意值。中药石菖蒲味辛、苦，温。归心、胃经。具有开窍豁痰，醒神益智之功效。石菖蒲醇提物气味芳香怡人，能够化湿浊,有豁痰开窍作用。

本发明提供的改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备原料还包括1～2质量份的蜜百部，优选为1～2质量份之间的任意值。中药蜜百部味甘、苦，微温。归肺经。具有润肺下气止咳，杀虫之功效。蜜百部醇提物气味香甜，具有润肺下气止咳的作用。

本发明提供的改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备原料还包括1质量份的苍耳子。中药苍耳子味辛、苦，温。归肺经。具有散风除湿，通鼻窍功效。苍耳子醇提气味芳香弥久，用于风寒头痛，鼻渊流涕。

上述四味中草药均有独特的固有香气，经过配伍，提取浓缩，优化配比，配方产生的香气弥久独特，按一定比例加入卷烟中能够给吸烟者带来愉悦感，增强吸烟过程的体验感。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参3份；石菖蒲2份；密百部1份；苍耳子1份。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参3份；石菖蒲2份；密百部2份；苍耳子1份。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参4份；石菖蒲2份；密百部2份；苍耳子1份。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参3份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参1份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

在本发明的一些具体实施方式中，所述改善卷烟香气品质的中草药组合物由包括以下质量份的中草药制备而成：

人参2份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

在本发明中，所述中药组合物为由人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子经过乙醇提取后得到的稠膏。

具体的，所述中草药组合物的制备方法包括以下步骤：

A)将人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子分别在水中浸泡后切片和烘干，得到药材片；

B)将所述药材片混合后加入乙醇溶液进行回流提取，得到醇提液；

C)将所述醇提液回收乙醇后浓缩，得到改善卷烟香气品质的中草药组合物。

本发明首先将药材筛选以及清洗，得到干净的药材。本发明对所述筛选和清洗的方法并没有特殊限制，本领域技术人员公知的方法即可。

接着，将所述药材浸泡和切片。在本发明中，优选按照如下方法对人参、石菖蒲、密百部和苍耳子进行浸泡和切片：

将所述人参在30～50摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述的石菖蒲在30～50摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述的密百部在20～40摄氏度的清水中浸泡8～10分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述苍耳子在60～80摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，50～60摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

然后，根据配方量，称取相应量的人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子，混合后，加入乙醇水溶液浸泡一段时间，然后进行回流提取。其中，所述乙醇水溶液的体积浓度为70％～75％，所述浸泡的时间为30～40分钟；所述回流提取的料液的质量体积比为1g:10～25ml，提取温度75～80℃，回流提取2～3次，每次1～1.5小时。每次回流提取完毕后，进行过滤，并合并醇提液。将醇提液放入旋转蒸发器内，回收乙醇。最后，进行浓缩，得到稠膏，即改善卷烟香气品质的中草药组合物。所述稠膏在60℃的相对密度为1.3～1.4。

本发明还提供了一种卷烟，包括上述改善卷烟香气品质的中草药组合物。

其中，所述中草药组合物在卷烟中的添加量为1wt％～5wt％。

在本发明中，所述卷烟按照如下方法进行制备：

1)烟叶加料:在卷烟产品烟叶配方中，加入上述制备得到的稠膏，使之产生最佳的品质效果；

在本发明中，向所述烟叶中加入上述制备得到的稠膏的方法为喷洒或浸料法。

在本发明的一些具体实施方式中，按照配方烟叶总重量的1～5％，称取上述制备的稠膏，用70％乙醇溶解放入加料桶内，调节加料设备的流量、喷射角度及喷射区域，使料液准确均匀的喷洒到烟片上。

2)制丝:将烟叶加料处理后的烟叶切丝、烘丝，并与梗丝、薄片丝掺配物均匀混合。

3)烟支卷制:将上述加入中草药配方的烟丝用卷烟生产设备，搭配卷烟纸、接装纸及滤嘴等烟用材料制备成滤嘴烟支或无滤嘴烟支。

应指出，上述加料的方法也适用于在烟丝的制备过程中，具体为在香烟制备过程中烟片处理完后，将烟叶切丝、烘丝，并与梗丝、薄片丝掺配物均匀混合，按照混合后烟丝总重量的1wt％～5wt％，称取上述制备的稠膏，用70％乙醇溶解放入加料桶内，调节加料设备的流量、喷射角度及喷射区域，使料液准确均匀的喷洒到烟丝上，使之产生最佳的品质效果。

本发明在保证原有卷烟烟气味道的同时，能够增加卷烟烟气的独特香味，降低卷烟烟气的刺激性，减少吸烟后烟气味道的残留，使吸烟者能够在保证原有吸烟感受的同时，增加对卷烟香味的体验，同时，该配方中的中草药能够缓解吸烟者口腔不适，减低烟气中的有害成份，给吸烟者带来新的体验。

本发明增加卷烟烟气香气的中草药配方，利用天然中草药经过提取浓缩、优化配比，经特殊处理后加入到卷烟中，在保留烟草原有口感和气味的同时，增加特定的香味，减低烟气的刺激，减少烟气的危害，同时改善吸烟者吸烟过程中或吸烟后口腔的不适感和烟气的残留。

本发明是将天然中草药经过配伍、提取、浓缩、优化配比，加入到卷烟中，使烟草达到提声香气、缓和烟气刺激、改善吸烟者吸烟过程中或吸烟后口腔的不适感和烟气的残留的目的。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的改善卷烟香气品质的中草药组合物的制备方法以及一种卷烟的制备方法进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。

实施例1

1、原料配方：

人参3份；石菖蒲2份；密百部1份；苍耳子1份。

2、制备方法：

(1)将药材筛选以及清洗，得到干净的药材。

(2)将所述人参在30～50摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述的石菖蒲在30～50摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述的密百部在20～40摄氏度的清水中浸泡8～10分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，40～50摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

将所述苍耳子在60～80摄氏度的清水中浸泡10～15分钟，取出切成1～2CM厚的薄片，50～60摄氏度恒温干燥箱内烘40分钟，放入干净的食品袋中备用；

(3)根据配方量，称取相应量的人参、石菖蒲、蜜百部和苍耳子，混合后，加入乙醇水溶液浸泡一段时间，然后进行回流提取。其中，所述乙醇水溶液的体积浓度为70％，所述浸泡的时间为30～40分钟；所述回流提取的料液比为1:10，提取温度75～80℃，回流提取3次，每次1小时。每次回流提取完毕后，进行过滤，并合并醇提液。将醇提液放入旋转蒸发器内，回收乙醇。并浓缩至稠膏，4℃冷藏保存待用。所述稠膏在60℃的相对密度为1.3～1.4。

(4)烟叶加料:在卷烟产品烟叶配方中，按照配方烟叶总重量的2％，称取上述制备的稠膏，用70％乙醇溶解放入加料桶内，调节加料设备的流量、喷射角度及喷射区域，使料液准确均匀的喷洒到烟片上，使之产生最佳的品质效果；

2)制丝:将烟叶加料处理后的烟叶切丝、烘丝，并与梗丝、薄片丝掺配物均匀混合。

3)烟支卷制:将上述加入中草药配方的烟丝用卷烟生产设备，搭配卷烟纸、接装纸及滤嘴等烟用材料制备成滤嘴烟支或无滤嘴烟支。

实施例2

1、原料配方：

人参3份；石菖蒲2份；密百部2份；苍耳子1份。

2、制备方法：

同实施例1

实施例3

1、原料配方：

人参4份；石菖蒲2份；密百部2份；苍耳子1份。

2、制备方法，同实施例1。

实施例4

1、原料配方：

人参3份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

2、制备方法，同实施例1。

实施例5

1、原料配方：

人参1份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

2、制备方法，同实施例1。

实施例6

1、原料配方：

人参2份；石菖蒲1份；密百部1份；苍耳子1份。

2、制备方法，同实施例1。

对比例1

1、原料配方：

人参3份；石菖蒲2份；密百部1份。

2、制备方法，同实施例1。

对比例2

1、原料配方：

人参3份；石菖蒲2份。

2、制备方法，同实施例1。

对比例3

1、原料配方：

人参3份；密百部1份。

2、制备方法，同实施例1。

对比例4

1、原料配方：

人参3份；苍耳子1份。

2、制备方法，同实施例1。

实验例1不同配比提取物样品对大鼠烟熏后的对比研究

1实验材料

1.1实验动物

健康雄性SD大鼠，84只，体质量180-200g，购于长春市亿斯实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(吉)-2018-0003。

1.2药品与试剂

人参、石菖蒲，密百部、苍耳子(吉林国安药业有限公司，20180201)，长白山白条烟(吉林烟草工业有限责任公司提供)，TNF-α(批号：20200924)、IL-6(批号：20200924)、IL-1β(批号：20200924)试剂盒(购自南京建成生物研究所有限公司)。

1.3实验仪器

电子天平(福州华志仪器有限公司)，JA2003B电子分析天平(上海越平仪器公司)，粉碎机(北京中兴伟业仪器公司)，WP-UP-III-40精密型超体纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)，4℃低温离心机(Cerrtrifuge 5810R)，恒温培养箱(EYEL4 SLI-700，上海爱朗仪器有限公司)，MultiskanFC型酶标仪(上海赛默飞世尔)。

2实验方法

2.1药物制备

提取物的制备：取人参、石菖蒲、密百部、苍耳子(组合物1，质量比3:2:1:1-实施例1)；人参、石菖蒲、密百部(组合物2，质量比3:2:1-对比例1)；人参、石菖蒲(组合物3，质量比3:2-对比例2)；人参、密百部(组合物4，质量比3:1-对比例3)；人参、苍耳子(组合物5，质量比3:1-对比例4)。按照实施例1的制备方法制备稠膏，4℃冷藏保存待用。

醇提物卷烟样品的制备：取原烟，分别按每支原烟重量的3％称取稠膏，用乙醇溶解后喷洒在原烟表面，低温烘干，现用现制。

2.2分组及给药

分组：将84只健康雄性SD大鼠随机分为空白组、原烟组、组合物1、合物2、组合物3、组合物4、组合物5，每组12只。

动物处理：除空白组外，其余各组大鼠每天分别在自制的烟熏仓内接受相应的烟熏、每次10支，每日两次，每次30min。连续4周。

2.3指标检测

2.3.1大鼠咳喘次数变化:末次实验30min后，观察大鼠5min内的出现咳嗽次数变化的情况并记录各组大鼠咳嗽次数。

2.3.2祛痰实验：末次实验后，各组分别取大鼠6只，IP 5％酚红溶液10mL/kg，30min后处死大鼠，分离气管段，取甲状软骨至气管分支处，剪碎，放入4mL 5％NaHCO₃溶液的试管中，浸泡4h，3000r/min离心15min，取上清液，置于波长546nm处，测吸光度(A)值。

2.3.3样本采集：将每组剩余6只大鼠麻醉后，去除颈部毛发，剪开颈部皮肤，钝性分离肌肉层，充分暴露气管，用手术缝合线，将右主支气管进行结扎，将气管于接近于下颚前端剪一“Y”型切口，插入带有16号灌胃针的5mL注射器，缓缓注入1×PBS缓冲液3mL，静置10-20s后，轻轻顺时针按压胸部，将缓冲液缓慢回抽，至于10mL离心管中，重复操作3次，回收率大于80％，将收集的肺泡灌洗液，3000r/min离心15min，-20℃保存待用。

2.3.4大鼠肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β测定：取2.3.3收集的肺泡灌洗液按试剂盒说明检测TNF-α、IL-6、IL-1β含量。

2.4统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以表示，比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义即具有明显差异；P＜0.01为具有显著性差异。

3.结果

3.1不同配比提取物样品对大鼠咳喘次数的影响

与原烟组相比，组合物1-4大鼠咳喘次数均降低，其中组合物1咳喘次数降低明显，且有统计学意义，结果见表1。

表1不同组合物样品对大鼠咳喘次数的影响

注：与原烟组比较，^*P＜0.05。

3.2不同组合物样品对大鼠酚红排泌量的影响

与原烟组相比，组合物1-5大鼠酚红排泌量均有所降低，其中组合物1酚红排泌量降低明显，且有统计学意义，结果见表2。

表2不同组合物样品对大鼠酚红排泌量的影响

注：与原烟组比较，^*P＜0.01。

3.3不同组合物样品对大鼠肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β的影响

与原烟组相比，各组大鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均有下降，其中组合物1中TNF-α的含量较原烟组下降程度明显，具有统计学意义，结果见表3。

表3不同组合物样品对大鼠肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响

注：与原烟组比较，^*P＜0.05。

4讨论

长时间吸入烟气或暴露在烟气环境中，会是大鼠气道上皮出现出现炎性反应，支气管内有黏液栓，肺泡灌洗液中炎性细胞增加，痰是体内水湿津液代谢异常，停聚在体内而成的病理产物，痰液对呼吸道疾病的发生发展起到重要的作用，因此促进呼吸道痰液的排出有助于呼吸道疾病的恢复。长时间吸烟会导致痰多，咳嗽。大鼠腹腔注射酚红后经腹腔吸收，部分酚红有支气管粘液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物使支气管分泌液增加时，酚红的量也随之增加。因此酚红分泌量可反映出祛痰的作用。本实验结果表明，添加中药组分的烟支，可不同程度的改善长期暴露烟气中大鼠的咳嗽次数，酚红的分泌量，降低大鼠肺中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。特别指出，在本实验的5种组合物中，组合物1(人参、石菖蒲、密百部、苍耳子)在咳嗽次数、祛痰、炎性因子含量等方面较其他4种组合物均有明显的减低，说明组合物1中各组分的配比更优于其他4组。

本实例以不同组合物为研究对象，观察比较5种组合物在降低咳嗽次数，祛痰、降低炎性因子方面的作用。结果表明，组合物1较其他4种组在咳嗽次数，祛痰、降低炎性因子方面更具优势。

实验例2

1实验材料

1.1实验动物

健康雄性SD大鼠，60只，体质量180-200g，购于长春市亿斯实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(吉)-2018-0003。

1.2药品与试剂

人参、石菖蒲，密百部、苍耳子(吉林国安药业有限公司，20180201)，长白山白条烟(吉林烟草工业有限责任公司提供)，醋酸地塞米松片(遂成药业股份有限公司，H41021038，规格0.75mg/片)，SOD(批号：20200924)、MDA(批号：20200924)、TNF-α(批号：20200924)、IL-6(批号：20200924)、IL-1β(批号：20200924)试剂盒(购自南京建成生物研究所有限公司)。

1.3实验仪器

电子天平(福州华志仪器有限公司)，JA2003B电子分析天平(上海越平仪器公司)，粉碎机(北京中兴伟业仪器公司)，WP-UP-III-40精密型超体纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)，4℃低温离心机(Cerrtrifuge 5810R)，恒温培养箱(EYEL4 SLI-700，上海爱朗仪器有限公司)，MultiskanFC型酶标仪(上海赛默飞世尔)。

2实验方法

2.1药物制备

提取物的制备：取人参、石菖蒲、密百部、苍耳子。分别按药材重量比3:2:1:1(配比1组-实施例1)，3:2:2:1(配比2组-实施例2)，1:1:1:1(配比3组-实施例5)称取药材，按照实施例1的制备方法制备稠膏，4℃冷藏保存待用。

醇提物卷烟样品的制备：取原烟，分别按每支原烟重量的3％称取稠膏，用乙醇溶解后喷洒在原烟表面，低温烘干，现用现制。

2.2分组及给药

分组：将60只健康雄性SD大鼠随机分为空白组、原烟组、醋酸地塞米松组、配比1组、配比2组、配比3组，每组10只。

动物处理：除空白组外,其余各组大鼠每天分别在自制的烟熏仓内接受相应的烟熏、每次10支，每日两次,每次30min。连续4周。

2.3指标检测

2.3.1大鼠咳喘次数变化:末次实验30min后，观察大鼠5min内的出现咳嗽次数变化的情况并记录各组大鼠咳嗽次数。

2.3.2样本采集：将大鼠麻醉后腹主动脉取血，4℃环境下3000r/min离心15min，分离血清，-20℃保存待用。

2.3.3大鼠血清SDO、MDA测定：取冻存血清按试剂盒说明检测血清中SOD、MDA含量。

2.3.4大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β测定：取冻存血清按试剂盒说明检测血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量。

2.4统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以表示，比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义即具有明显差异；P＜0.01为具有显著性差异。

3.结果

3.1不同配比提取物样品对大鼠咳喘次数的影响

与空白组比较，模型组大鼠咳喘次数出现明显增加(P＜0.01)，与模型组相比，醋酸地塞米松组、配比1组、配比2组、配比3组大鼠咳喘次数均出现明显降低(P＜0.05)，结果见表4。

表4不同配比提取物样品对大鼠咳喘次数的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05。

3.2不同配比提取物样品对大鼠血清SOD、MDA的影响

与空白组相比，模型组大鼠血清SOD含量出现明显下降(P＜0.01)、MDA出现明显升高(P＜0.01)，给药后，与模型组相比醋酸地塞米松组、配比1组、配比2组、配比3组大鼠血清SOD出现明显升高、MDA出现明显下降，结果见表5。

表5不同配比提取物样品对大鼠血清SOD、MDA含量的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较。

3.3不同配比提取物样品对大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β的影响

与空白组比较，模型组大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β出现明显增加(P＜0.01)，与模型组相比，醋酸地塞米松组、配比1组、配比2组，配比3组大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β含量均出现显著降低(P＜0.01)，结果见表6。

表6不同配比提取物样品对大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05。

4讨论

在探讨药物在治疗慢性支气管炎疗效中，复制相对精准慢性支气管炎动物模型至关重要，本发明采用烟熏法诱导慢性支气管炎模型大鼠的方法，该方法是将动物放入大小合适烟室内，通入烟雾，一段时间后取出动物，根据实际需求，重复不同次数和天数，以获得所需的支气管损伤模型。此法由于操作简便，可用于鼠、犬、猴等多种动物，支气管慢性炎症病变确切，成为最常用的方法。

烟熏法诱导慢性支气管炎小鼠气道上皮下出现炎性细胞，支气管内有黏液栓，肺泡灌洗液中蛋白含量增加，白细胞总数增加，其机制与氧化应激过强有关。本实验结果表明，不同配比提取物样品改善了慢性支气管炎模型大鼠血清中SOD、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β等因子水平。初步证明了不同配比提取物样品对慢性支气管炎有一定的治疗作用。

本发明以不同配比提取物样品为研究对象，观察其加入卷烟对大鼠烟熏后的影响。结果表明，不同配比提取物样品可有效的降低大鼠咳喘次数，提升SOD、降低MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β等相关水平，可以降低原烟的危害。

实验例3不同配比提取物样品对卵清蛋白联合烟熏法诱导咳嗽变异性哮喘的作用研究

1实验材料

1.1实验动物

健康雄性SD大鼠，60只，体质量180-200g，购于长春市亿斯实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(吉)-2018-0003。

1.2药品与试剂

人参、石菖蒲，密百部、苍耳子(吉林国安药业有限公司，20180201)，长白上白条烟(吉林烟草工业有限责任公司提供)、醋酸地塞米松片(遂成药业股份有限公司，H41021038，规格0.75mg/片)，卵清蛋白(Sigma，#SLBS6919)，氯化钠注射液(吉林省都邦药业股份有限公司，H22023069)，IL-4(批号：20200924)、ΙL-6(批号：20200924)、IFN-γ(批号：20200924)、IgE(批号：20200924)试剂盒(购自南京建成生物研究所有限公司)。

1.3实验仪器

电子天平(福州华志仪器有限公司)，JA2003B电子分析天平(上海越平仪器公司)，JSC-202超声雾化器(辽宁鞍山电子医疗仪器厂)，粉碎机(北京中兴伟业仪器公司)，WP-UP-III-40精密型超体纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)，4℃低温离心机(Cerrtrifuge5810R)，EYEL4 SLI-700恒温培养箱(上海爱朗仪器有限公司)，BC-5300Vet血细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗)MultiskanFC型酶标仪(上海赛默飞世尔)。

2、实验方法

2.1药物制备

提取物的制备：取人参、石菖蒲、密百部、苍耳子。分别按药材重量比3:2:1：1(配比1组-实施例1)，3:2:2:1(配比2组-实施例2)，1:1:1:1(配比3组-实施例5)称取药材，按照实施例1的制备方法制备稠膏，4℃冷藏保存待用。

醇提物卷烟样品的制备：取原烟，分别按每支原烟重量的3％称取稠膏，用乙醇溶解后喷洒在原烟表面，低温烘干，现用先制。

2.2分组及模型制备

分组：将60只健康雄性SD大鼠随机分为空白组、原烟组、醋酸地塞米松组、配比1组、配比2组、配比3组，每组10只。

模型制备：除空白组外,各组大鼠每天在自制的烟熏仓内接受相应受试物烟熏，每次10只，每日两次,每次30min，烟熏两周后开始隔日腹腔注射10％卵清蛋白溶液1mL三次，将大鼠置于自制的雾化箱给予5％卵清蛋白溶液雾化激发，每天一次，每次30min，共激发3周，激发过程中继续烟熏，整个过程共持续4周^[12]，空白对照组致敏时采用相同剂量生理盐水腹腔注射，激发时则采用相同剂量蒸馏水雾化激发。

2.3指标检测

2.4.1大鼠引喘潜伏期:末次实验30min后，在雾化开始后，同时开始计时，记录大鼠出现明显喘息表现的时间，即为引喘潜伏期。

2.4.2样本采集：将大鼠麻醉后腹主动脉取血，取全血1mL加入含有EDTA的抗凝管中待用，剩余血液4℃环境下3000r/min离心15min，分离血清，-20℃保存待用。去除颈部皮毛，钝性分离气管，剪开气管，注射器缓慢注入PBS缓冲液1ml，静置10s后，轻轻按压胸部，将缓冲液回抽，置于5ml离心管中，重复操作6次，肺泡灌洗液以3500r/min离心10min，取上清液分装冻存于-20℃冰箱待用。

2.4.3血液白细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的检测：取含有全血的抗凝管置于全自动血细胞分析仪下，自动检测全血中白细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的数量。

2.4.4大鼠血清IL-4、ΙL-6、IFN-γ测定：取冻存血清按试剂盒说明检测血清中IL-4、ΙL-6、IFN-γ含量。

2.4.5大鼠肺泡灌洗液IgE、IFN-γ测定：取冻存肺泡灌洗液按试剂盒说明检测肺泡灌洗液中IgE、IFN-γ含量。

2.5统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以表示，比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义即具有明显差异。

3实验结果

3.1不同配比提取物样品对咳嗽变异性哮喘大鼠引喘潜伏期的影响

与空白组比较，模型组大鼠引喘潜伏期出现明显降低(P＜0.01)，与模型组相比各给药组大鼠引喘潜伏期出现明显延长(P＜0.01)。

表7不同配比提取物样品对咳嗽变异性哮喘大鼠引喘潜伏期的影响

3.2不同配比提取物样品对咳嗽变异性哮喘大鼠WBC、EOS、NEU的影响

与空白组相比，模型组大鼠血液WBC、EOS、NEU出明显升高(P＜0.01)，与模型组相比各组大鼠WBC、EOS、NEU均有不同程度的下降(P＜0.05)。

表8不同配比提取物样品对咳嗽变异性哮喘大鼠WBC、EOS、NEU的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05。

3.3不同配比提取物样品对咳嗽变异性哮喘大鼠血清IL-4、ΙL-6、IFN-γ含量的影响

与空白组相比，模型组大鼠血清中IL-4、ΙL-6含量出现明显升高(P＜0.01)IFN-γ含量出现明显降低(P＜0.01)，经给药后与模型组相比，各给药组大鼠血清IL-4、ΙL-6(P＜0.01)含量出现明显降低(P＜0.01)，IFN-γ含量出现明显升高(P＜0.01)。

表9不同配比提取物样品对大鼠血清IL-4、ΙL-6、IFN-γ含量的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较^*P＜0.05。

3.4不同配比提取物样品对大鼠肺泡灌洗液IgE、IFN-γ含量的影响

与空白组相比，模型组大鼠肺泡灌洗液中IgE含量出现明显升高，IFN-γ含量出现明显降低(P＜0.01)经给药后与模型组相比，各给药组大鼠肺泡灌洗液IgE含量出现明显降低(P＜0.01)，IFN-γ含量出现明显升高(P＜0.01)。

表10不同配比提取物样品对大鼠肺泡灌洗液IgE、IFN-γ含量的影响

注：与空白组比较，^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05。

4讨论

现代医学对于咳嗽变异性哮喘的诊断多集中在血常规、肺功能测定、影像学检查、气道炎症评估等方面。故本发明采用卵清蛋白结合烟熏复制大鼠咳嗽变异性哮喘，通过大鼠引喘潜伏期、全血中白细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的数量、血清中IL-4、ΙL-6、IFN-γ含量和肺泡灌洗液中IgE、IFN-γ含量变化反应不同配比提取物样品对于咳嗽变异性哮喘的治疗作用。

由实验结果可知：不同配比提取物样品可以显著提高咳嗽变异性哮喘的引喘潜伏期，减轻了咳嗽变异性哮喘大鼠的咳嗽症状，缓解了咳嗽变异性哮喘。全血中白细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的数量的变化，体现免疫功能的作用发挥，IL-4、ΙL-6作为白介素家族的两种标志性白介素，反映了咳嗽变异性哮喘大鼠的炎症水平，而IFN-γ具有抗病毒，抗肿瘤和免疫调控的作用。实验结果表明不同配比提取物样品能够降低血液中WBC、EOS、NEU含量、降低大鼠血清中IL-4、ΙL-6含量、升高血清中IFN-γ含量、降低肺泡灌洗液中IgE含量、升高肺泡灌洗液中IFN-γ含量。表明不同配比提取物样品可以有效降低咳嗽变异性哮喘大鼠肺部及体内的炎症水平。

本发明以咳嗽变异性哮喘大鼠为主要研究对象，观察不同配比提取物样品对其作用。实验结果表明，不同配比提取物样品可以有效缓解咳嗽变异性哮喘大鼠的症状，并减轻咳嗽变异性哮喘大鼠体内及肺部的炎症水平，缓解原烟对肺部的危害。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。