具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明方法参数优化试验

1、粉碎度对沙棘蛋白提取效果的影响

对沙棘籽粕原料进行粉碎处理，可破坏沙棘籽粕的细胞壁，从而有利于细胞内的有效成分提出，为了提高沙棘籽蛋白的提取效果，对沙棘籽粕原料的粉碎粒度进行了研究，设定了40目、60目、80目、100目和120目共5个粉碎粒度进行试验。结果表明：随着粉碎粒度的增加，提取的沙棘籽蛋白的含量和提取率也不断增加，当粉碎粒度大于80目后，增长趋势平缓。因此，选取粉碎粒度为80目为宜(详见附图2和3)。

2、加酶量对沙棘蛋白提取效果的影响

因沙棘籽粕中部分沙棘蛋白与纤维相结合，因此选用纤维素酶进行酶解，将与纤维素结合的那部分蛋白与纤维素分离；另外还可以将沙棘籽粕中的纤维素分离提取出，再从剩余物中用减提法提取蛋白，可大大降低碱溶液的用量，并提高提取出的蛋白质产品的纯度。

从试验结果可以看出，沙棘蛋白提取率和蛋白含量随加酶量的增多逐渐增加，在加酶量为240U/g后趋于平稳。考虑到加酶量为240U/g后的蛋白含量增长幅度不大，确定加酶量为240U/g。(详见附图4和5)。

3、料液比对沙棘蛋白提取效果的影响

对沙棘籽蛋白提取过程中的醇提料液比和碱提料液比进行了单因素对比实验。

试验结果表明，醇提过程中在料液比为1:6～1:12之间时，蛋白含量增长迅速，当进一步增加料液比后，蛋白质含量又有所降低；蛋白提取率在料液比1:10时为最高，随后缓慢下降，因此综合考虑后确定料液比为1:12(详见附图6和7)。

在碱提过程中，根据试验结果可以看出，随着料液比的增加，蛋白质的含量呈现先上升后下降的趋势，在1:12时达到最大值，而提取率随着料液比的增加不断提高，1:12以后增长缓慢。因此，综合考虑碱提过程中，选取料液比的范围为1:10～1:14(详见附图8和9)。

4、pH值对沙棘蛋白提取效果的影响

在碱提过程中，pH值对沙棘蛋白的提取效果起着决定性的作用。通过试验结果可知，随着pH值的增加，蛋白质溶解性提高，碱提提取率显著上升，碱提蛋白的蛋白质含量先缓慢上升后迅速下降，在pH为10时达最大值，这是由于蛋白质在高pH值下水解导致纯度的降低。随着pH值增大，提取液颜色加深，且过高pH值容易使蛋白质分子间相互作用产生有毒性的赖氨酰丙氨酸，影响蛋白的安全性。因此，pH值不易过高。综合考虑，选取pH值的范围为10～11(详见附图10和11)。

5、碱提温度对沙棘蛋白提取效果的影响

通过试验结果显示，随着温度的增加，碱提提取率增大，蛋白质含量从40℃后开始下降，可能是由于水分子的热运动加剧使得蛋白质结构展开，非极性基团的暴露，导致蛋白质分子间发生聚集和沉淀作用。综合考虑，选取提取温度范围为40～50℃(详见附图12和13)。

6、碱提时间对沙棘蛋白提取效果的影响

在碱提过程中，随着提取时间的增加，碱提提取率缓慢增加，在50min后增长缓慢；蛋白质含量缓慢增加，在50min后开始降低；可能是由于长时间的提取会导致蛋白质的水解，促使蛋白质含量下降，影响提取效果。综合考虑，选取提取时间的范围为40～50min(详见附图14和15)。

7、正交试验

设置4因素4水平正交试验，其中A为碱提料液比，B为碱提pH值，C为碱提温度/℃，D为碱提时间/min(详见表1)。

表1正交试验因素水平

正交试验结果(表2)表明，RB>RC>RD>RA，各因素对沙棘籽蛋白提取率及含量影响的主次顺序为pH值>提取温度>提取时间>料液比，其中pH值对其影响最大。最佳的提取工艺参数为A₃B₂C₂D₃，即料液比为1:14，pH值为10，提取温度为45℃，提取时间为50min。设计三个平行试验，对最佳提取工艺进行验证，发现产品的提取率为78.45％，蛋白含量为82.04％。

表2正交实验结果

实施例2

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过80目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加240u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:12；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1:14的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到45℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至10搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至10，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为50min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置7h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

实施例3

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过40目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加120u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:6；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1：8的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到40℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至11搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至11，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为40min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置8h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

实施例4

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过120目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加360u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:14；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1：16的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到50℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至12搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至12，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为50min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置6h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

实施例5

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过110目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加200u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:10；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1:10的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到30℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至9搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至9，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为60min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置6.5h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

实施例6

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过110目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加220u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:11；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1：13的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到70℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至8搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至8，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为30min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置7.5h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

实施例7

一种从沙棘籽粕中提取沙棘籽蛋白的方法，具体步骤包括如下：

步骤1，原料预处理：将沙棘籽粕烘干粉碎后，过100目筛，备用；

步骤2，酶解：在步骤1得到的沙棘籽粕中，加140u/g纤维素酶去纤维素，使与纤维素结合的蛋白分离出来；

步骤3，醇提：将75％乙醇加入提取罐内，开启搅拌，缓慢加入沙棘籽粕粉，严禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，开启蒸汽加热，加热到45℃搅拌90min后离心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕与乙醇的料液比为1:11；

步骤4，减解：

S1，第一次减提：将步骤1预处理过的沙棘籽粕与水按1：15的料液比加入另一提取罐内，开启搅拌，缓慢加入醇提离心后的沙棘籽粕沉淀，搅拌均匀；开启蒸汽加热，加热到55℃时缓慢加入20％NaOH水溶液，调pH至9搅拌，在反应过程中，及时监控pH的变化情况，及时加碱调pH至9，离心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次碱提，其中减提时间为38min；

S2，第二次减提：依照步骤S1的方法对沙棘籽粕沉淀进行第二次碱提，离心后将两次上清液混合在一起；

步骤5，酸沉：将步骤4碱提离心后的上清液加入新的提取罐中，在搅拌条件下缓慢加入乳酸，调pH至4.5；pH稳定后停止搅拌，静置7h，备用；

步骤6，离心：将酸沉静置后的溶液离心，取出离心后的沉淀；

步骤7，干燥、粉碎：温度在45℃以下将沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且过80目筛网。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。