具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明的第一方面提供了一类含有泊沙康唑的四价铂配合物，结构如通式I所示：

其中，为顺铂、卡铂、庚铂、奈达铂、奥沙利铂、洛铂、米铂、吡铂、NDDP或

R₃为羟基、直链或支链的C1～C20饱和烷基酯、直链或支链的C1～C20 不饱和烷基酯或者直链或支链的C1～C20氨基甲酸酯；n为0～5的整数。

所述一类含有泊沙康唑的四价铂配合物的结构为以下结构的一种：

本发明的第二方面提供了一类含有泊沙康唑的四价铂配合物的制备方法，

方法一：

向反应容器中加入二价铂抗肿瘤药物IV和双氧水溶液，反应温度控制在20～60℃进行反应，制备得到双羟基取代的氧化四价铂V；

向反应容器中加入泊沙康唑II和酸酐，以CH₃CN或DMF做溶剂， 50℃～100℃反应制备得到含有羧酸侧链的泊沙康唑III；

向反应容器中加入溶剂、TBTU、三乙胺和含有羧酸侧链的泊沙康唑 III，用氮气置换体系中的空气，室温条件下搅拌反应后向反应体系中加入双羟基取代的氧化四价铂V，室温下反应12～72小时，减压蒸馏除去溶剂，柱层析得到R₃为羟基的泊沙康唑的四价铂配合物I-1；

方法二：

向反应容器中加入溶剂、方法一中的R₃为羟基的泊沙康唑的四价铂配合物I-1和酸酐，用氮气置换体系中的空气，室温条件下搅拌反应，减压蒸馏除去溶剂DMF，柱层析得到R₃为直链或支链的C1～C20饱和或不饱和烷基酯的泊沙康唑的四价铂配合物I。

方法三：

向反应容器中加入溶剂、方法一中的R₃为羟基的泊沙康唑的四价铂配合物I-1和含有烷基侧链的异氰酸酯，用氮气置换体系中的空气，室温条件下搅拌反应，减压蒸馏除去溶剂DMF，柱层析得到R₃为直链或支链的 C1～C20氨基甲酸酯的泊沙康唑的四价铂配合物I；

所述溶剂为DMF或CH₃CN。

以顺铂(IV-1)为例，进行说明。

顺铂(IV-1)与过量的双氧水反应，得到中间体氧铂(V-1)。

泊沙康唑(II)与酸酐在乙腈或DMF溶剂中加热反应得到含有羧酸侧链的泊沙康唑(III)。

在DMF溶剂中，氧铂(V-1)与含有羧酸侧链的泊沙康唑(III)在 TBTU和三乙胺作用下，制备得到R₃基团为羟基的目标化合物VI。

目标化合物VI与直链或支链的饱和或不饱和的C2～C40酸酐反应可得到R₃基团为饱和或不饱和的C1～C20烷基酯的目标化合物I。目标化合物 VI与直链或支链的饱和或不饱和的C1～C20异氰酸酯反应可得到R₃基团为饱和或不饱和的C1～C20氨基甲酸酯的目标化合物I。

参照上述合成方法，卡铂、庚铂、奈达铂、奥沙利铂、洛铂、米铂、吡铂、NDDP或可以制备得到含有泊沙康唑的四价铂配合物。如奥沙利铂(VIII)经双氧水氧化制备得到氧化奥沙利铂(IX)，之后与含有羧酸侧链的泊沙康唑反应制备得到目标化合物X。

本发明的第三方面提供了一类含有泊沙康唑的四价铂配合物在制备抗肿瘤药物和抗真菌药物中的应用。

所述一类含有泊沙康唑的四价铂配合物优选为化合物3,4,5和9。

所述肿瘤为肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌及顺铂耐药的肺癌等恶性肿瘤。所述真菌为白念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌等各种真菌感染。

现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

以下实施例所涉化合物对应通式Ⅰ的化学结构式、¹H-NMR、¹³C-NMR 和HRMS数据详见表1，其中编号1～10分别对应化合物1～10、实施例 1～10。

表1.目标化合物1～10的化学结构式、¹H-NMR、¹³C-NMR和HRMS数据

实施例1：化合物1的合成

取1.0g顺铂即化合物IV-1加入25mL 30％的双氧水，在60℃下反应2 h，抽滤，滤液静置得到黄色针状固体0.95g氧铂即化合物V-1，产率为 85％。

取泊沙康唑即化合物II(1.0g,1.43mmol)与丁二酸酐(0.71g,7.1mmol) 在DMF溶剂中，100℃下加热搅拌反应12h，柱层析纯化(DCM：MeOH＝ 20：1)，制备得到含有羧酸侧链的泊沙康唑III-1(0.52g,45％)。

将含有羧酸侧链的泊沙康唑III-1(50mg,0.0625mmol)、TBTU(30mg, 0.0937mmol)和三乙胺(9.5mg,0.0937mmol)依次加入2mL的干燥DMF中，室温搅拌10min后，加入氧铂V-1(21mg,0.0625mmol)，氮气保护下室温搅拌12h。反应结束后，蒸干溶剂，残留物用硅胶柱层析(DCM：MeOH＝ 20：1)进行纯化，得到化合物1为棕色固体(32mg，产率46％)。

实施例2：化合物2的合成

化合物1(30mg,0.0269mmol)和乙酸酐(2.8mg,0.028mmol)依次加入2 mL的DMF中，在室温下搅拌反应12小时。反应结束后，蒸干溶剂，残留物用硅胶柱层析(DCM：MeOH＝20：1)进行纯化，得到棕色固体化合物2 (23mg，产率74％)。

实施例3：化合物3的合成

参照实施例2。化合物1(30mg,0.0269mmol)与正己酸酐(6mg,0.028 mmol)在DMF(2mL)中反应得到棕色固体化合物3(22mg，产率64％)。

实施例4：化合物4的合成

参照实施例2。化合物1(30mg,0.0269mmol)与正辛酸酐(7.6mg,0.028 mmol)在DMF(2mL)中反应得到棕色固体化合物4(20mg，产率60％)。

实施例5：化合物5的合成

参照实施例2。化合物1(30mg,0.0269mmol)与异氰酸己酯(3.5mg,0.028 mmol)在DMF(2mL)中反应得到棕色固体化合物5(22mg，产率65％)。

实施例6：化合物6的合成

参照实施例2。化合物1(30mg,0.0269mmol)与正辛基异氰酸酯(4.3 mg,0.028mmol)在DMF(2mL)中反应得到棕色固体化合物6(24mg，产率 67％)。

实施例7：化合物7的合成

参照实施例2。化合物1(30mg,0.0269mmol)与异氰酸十二烷基酯(5.9 mg,0.028mmol)在DMF(2mL)中反应得到棕色固体化合物7(26mg，产率 72％)。

实施例8：化合物8的合成

参照实施例1。泊沙康唑与戊二酸酐在DMF溶剂中，加热搅拌反应制备得到含有羧酸侧链的泊沙康唑III-2。将含有羧酸侧链的泊沙康唑III-2(50 mg,0.0614mmol)、TBTU(29.5mg,0.0921mmol)和三乙胺(9.3mg,0.0921 mmol)依次加入2mL的干燥DMF中，室温搅拌10min后，加入氧铂(20.4 mg,0.0625mmol)，氮气保护下室温搅拌12h。反应结束后，蒸干溶剂，残留物用硅胶柱层析(DCM：MeOH＝20：1)进行纯化，得到化合物8为棕色固体(30mg，产率43％)。

实施例9：化合物9的合成

参照实施例2。化合物8(30mg,0.0265mmol)与乙酸酐(2.8mg,0.028 mmol)在DMF(2mL)中反应得到淡黄色固体化合物9(25mg，产率80％)。

实施例10：化合物10的合成

参照实施例1。将含有羧酸侧链的泊沙康唑III-1(50mg,0.0625mmol)、 TBTU(30mg,0.0937mmol)和三乙胺(9.5mg,0.0937mmol)依次加入2mL 的干燥DMF中，室温搅拌10min后，加入氧铂IX(26.8mg,0.0625mmol)，氮气保护下室温搅拌12h。反应结束后，蒸干溶剂，残留物用硅胶柱层析 (DCM：MeOH＝20：1)进行纯化，得到化合物10为淡黄色固体(36mg，产率47％)。

实施例11：本发明化合物的抗肿瘤活性试验

对本发明的化合物进行肿瘤细胞增殖抑制试验，试验方法采用常规的 CKK-8法。

细胞株选用肺癌A549、肝癌HepG2、肠癌HCT116，乳腺癌MDA-MB- 231和顺铂耐药的肺癌A549，均购自上海生命科学研究院细胞库。

培养液为DMEM+10％NBS+双抗。

样品液配制：待测化合物用DMSO(Merck)溶解后，配成浓度为10mM 的母液。用培养基稀释母液，配成药物的最终浓度分别为100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.562μM和0.781μM。

将抗肿瘤化合物顺铂(CDDP)、泊沙康唑(PSZ)及以顺铂和泊沙康唑1:1 混合(PSZ+CDDP)以同样的条件配成对照品溶液。

96孔板每孔加入浓度为8×10⁴个/mL的细胞悬液100μL，即8000个细胞 /孔，置37℃、5％CO₂培养箱内。24小时后，上层培养液吸掉，加入含有样品的培养液和对照品液，100μL/孔，37℃作用72小时。每孔加入CKK-8 10μL，置培养箱内，作用1小时后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值，计算半数抑制浓度IC₅₀。

部分优选化合物的抗肿瘤活性详见表2，其中，样品1～10是指相应实施例中制备的含有泊沙康唑的四价铂配合物，如化合物1表示在实施例1中所得到的化合物，同理类推。

表2.本发明部分化合物对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC₅₀(单位：μM)

N.D.代表未测试

结果显示，本发明的化合物总体表现出广谱、优异的抗肿瘤活性，对肝癌HepG2、肺癌A549、肠癌HCT116、乳腺癌MDA-MB-231均产生了优异的增殖抑制作用。部分化合物的抗肿瘤活性强于顺铂。如化合物4总体表现出最优的抗肿瘤活性，对肺癌A549、肝癌HepG2、肠癌HCT116和乳腺癌 MDA-MB-231的半数抑制浓度IC₅₀都低于4μM。此外，部分高活性化合物对顺铂耐药的A549肿瘤细胞仍表现优异的抗肿瘤活性。如化合物5、6和7 对顺铂耐药的肺癌A549的IC₅₀低于5μM，明显优于顺铂(IC₅₀＝31.47μM)。此外，这类化合物的抗肿瘤活性要优于泊沙康唑与顺铂的联用。因此，本发明提供的化合物具有全新的骨架结构，具有优异的抗肿瘤活性，可以进行抗肿瘤药物的开发。

实施例12：本发明化合物的抗真菌活性试验

(一)体外抗真菌活性筛选

选取七种常见的人体致病真菌作为试验菌。1)白念珠菌(Candida albicans，标准株SC5314)；2)白念珠菌泊沙康唑耐药株(Candida albicans 103)；3)克柔念珠菌(Candidakrusei)；4)热带念珠菌(Candida tropicalis)；5) 新生隐球菌(Cryptococcusneoformans,标准株32609)；6)光滑念珠菌(Candida glabrata)；7)近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis)。阳性对照药选取泊沙康唑 (PSZ,Posaconazole)、顺铂(CDDP,Cisplatin)和泊沙康唑与顺铂1:1混合物 (PSZ+CDDP)。

菌悬液配制：菌株经YEPD液体培养基35℃培养16小时，两次活化，用血细胞计数板计数，以RPM1640液体培养基调整浓度至10^-3-5×10^-3个/mL。

药液配制：将药物配成10mM的DMSO药物储存液。

接种：96孔板1号孔加RPM1640 100μL作空白对照，2号孔加菌悬液200 μL和药液2μL，2-11号孔进行倍比稀释，各孔药物浓度分别为100,50,25, 12.5,6.25,3.125,1.563,0.782,0.391,0.196μM，菌悬液位100μL。12号孔加菌悬液100μL，不加药液，作为阳性对照。对于白念珠菌(Candida albicans，标准株SC5314)，泊沙康唑及泊沙康唑与顺铂联用的起始浓度为25μM。

培养及检测：念珠球菌培养24h之后，测定结果；新型隐球菌培养72h 之后，测定结果。设阳性对照孔光密度值(OD)值为100％，以光密度值比阳性对照孔降低80％以上的最低药物浓度为最小抑菌浓度(MIC₈₀)。

抗真菌活性测试结果如表3所示。

表3.化合物的体外抗真菌活性(MIC,μM)^a

^aC.alb.,白念珠菌；C.kru.,克柔念珠菌；C.tro.,热带念珠菌；C.neo.,新生隐球菌；C.Gla., 光滑念珠菌；C.par.,近平滑念珠菌；PSZ,泊沙康唑；CDDP,顺铂。

如表3所示，该类化合物表现优异、广谱的抗真菌活性，尤其对泊沙康唑耐药的白念株菌仍表现出优异的抗真菌活性。如化合物3～6和9对泊沙康唑耐药的白念株菌103的最小抑菌浓度MIC≦12.5μM，明显优于泊沙康唑(MIC>500μM)。

综上所述，该类含有泊沙康唑单元的四价铂配合物可以应用于抗肿瘤药物和抗真菌药物的研发，对于肿瘤病人及防治肿瘤病人的真菌感染具有潜在的应用价值。