一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法
技术领域
本发明属于医药中间体合成
技术领域
，具体为一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法。背景技术
氨基酸是构成生物体营养所需蛋白质的最基本的物质，它在机体内具有显著的生理特性，是生物体不可缺少的营养成分之一；氨基酸的用途极其广泛，如食品、医药、饲料等。
多肽类药物具有活性高、疗效稳定、毒副作用小、用量少、作用靶点专一等优点,已广泛涉足抗肿瘤、心脑血管、抗病毒抗菌性活性肽以及疫苗、诊断试剂盒等领域，具有广阔的应用前景。但是，天然的多肽类药物因含量少、纯度低等缺限，已无法满足临床应用的需求。目前，引入非天然氨基酸结构单元是一种非常有效的方法以克服天然多肽类药物的内在缺陷，这对于推广多肽类药物的应用有重要意义。
多肽化学合成是将不同氨基酸按一定顺序通过肽键进行连接，为了避免副反应的进行，需要事先将不参与反应的氨基以及其它活性基团(吲哚、咪唑等)进行保护，以得到具有特定顺序的多肽。
N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物是合成多种多肽和多种药物的常用中间体，如降糖药索马鲁肽、治疗骨质疏松症特立帕肽等,索马鲁肽的结构式如下所示：
目前对于N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物的制备方法未有报道。而N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物的制备方法的关键是N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物的制备，即α-NH2的保护与脱保护。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以L-色氨酸衍生物为原料制备色氨酸衍生物医药中间体N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物的方法。该方法具有工艺简单、操作方便、条件温和、收率较高、纯度较高、成本较低等特点。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于制备方法包括以下两种方案中的任意一种：
方案一：以如式(Ⅱ)所示的L-色氨酸衍生物为起始原料，依次经酯化、酰胺化、Boc保护、水解、酰胺化制得目标产物，即为如式(Ⅰ)所示的色氨酸衍生物医药中间体，其反应方程式为:
式中，R为氢或C4位、5位、6位取代的甲基或甲氧基；
方案二：以如式(Ⅱ)所示的L-色氨酸衍生物为起始原料，依次经酯化、酰胺化、Boc保护、氢化、水解、酰胺化制得式(Ⅰ)所示化合物，且第一步酯化与最后一步酰胺化与方案一相同，其反应方程式为:
式中，R为氢或C4位、5位、6位取代的甲基或甲氧基。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一具体包括如下步骤：
(1)以式(Ⅱ)所示的L-色氨酸衍生物、甲醇为起始原料，在催化剂A存在下，加热至回流进行酯化反应，反应结束后，冷却、浓缩去除甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入萃取剂A萃取，取有机相依次经水洗、干燥、过滤、浓缩，得到中间体如式(Ⅲ)所示的化合物；
(2)将式(Ⅲ)所示的化合物加入四氢呋喃中，在碱A的作用下，与三氟乙酸酐TFAA进行酰胺化反应，反应结束后，浓缩除去四氢呋喃，再经水洗、过滤、烘干后得到式(Ⅳ)所示的化合物；
(3)将式(Ⅳ)所示的化合物加入溶剂A中，在催化剂B的作用下，与Boc酸酐进行酰胺化反应，反应结束后，加入水和萃取剂B，取有机相水洗、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅴ)所示的化合物；
(4)将式(Ⅴ)所示的化合物加入混合溶剂B中，在碱B的作用下进行水解反应，反应结束后，浓缩除去部分溶剂，加入萃取剂C，低温调节水层pH至5～7，萃取剂萃取，取有机相用饱和食盐水洗涤、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅵ)所示的化合物；
(5)将式(Ⅵ)所示的化合物、碱C的水溶液、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯依次加入溶剂C中，于室温下进行酰胺化反应，反应结束后，浓缩除去溶剂C，加入萃取剂D，取有机相用饱和食盐水溶液洗涤、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到目标化合物，即式(Ⅰ)所示的N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于R＝H、5-Me。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一步骤(1)中的催化剂A为浓硫酸、磷酸、氯化亚砜、氯化氢，优选为浓硫酸、氯化亚砜，所述催化剂与式(Ⅱ)所示的L-色氨酸衍生物的物质的量比为1.0～4.0:1，优选为1.5～3.0:1；萃取剂A为二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、甲苯等，优选为二氯甲烷、氯仿。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一步骤(2)中的三氟乙酸酐与式(Ⅲ)所示的化合物的物质的量比为0.8～3.0:1，优选为1.0～2.5:1；碱A为吡啶、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺，所述碱A与式(Ⅲ)所示的化合物的物质的量比为1.0～2.0:1，优选为1.0～1.8:1。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一步骤(3)中的催化剂B为4-二甲氨基吡啶或4-吡咯烷基吡啶，优选为4-二甲氨基吡啶，所述催化剂B与式(Ⅳ)所示的化合物的物质的量比为0.04～0.20:1，优选为0.06～0.18:1；溶剂A为二氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、丙酮、乙腈，优选为四氢呋喃、乙腈；Boc酸酐与式(Ⅳ)所示的化合物的物质的量比为1.0～1.5:1，优选为1.1～1.3:1；萃取剂B为二氯甲烷、石油醚、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯或乙酸甲酯，优选为二氯甲烷、乙酸乙酯；
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一步骤(4)中的碱B为碳酸钠、氢氧化钠、碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化锂，优选为碳酸钾、氢氧化钠，所述碱B与式(Ⅴ)所示的化合物的物质的量比为2.0～4.0:1，优选为2.0～3.0:1；混合溶剂B为甲醇/水、四氢呋喃/水、乙腈/水、乙醇/水、异丙醇/水，优选为甲醇/水；萃取剂C为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯或乙酸甲酯，优选为二氯甲烷、乙酸乙酯；
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案一步骤(5)中的碱C为碳酸钠或碳酸氢钠，所述碱C与式(Ⅵ)所示的化合物的物质的量比为1.0～3.0:1，优选为1.5～2.5:1；溶剂C为1,4-二氧六环、四氢呋喃、乙腈、乙酸乙酯，优选为乙酸乙酯、四氢呋喃；9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯与式(Ⅵ)所示的化合物的物质的量比为1.0～1.5:1，优选为1.0～1.2:1；萃取剂D为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯或乙酸甲酯，优选为乙酸乙酯。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案二具体包括如下步骤：
(1)以式(Ⅱ)所示的L-色氨酸衍生物、甲醇为起始原料，在催化剂A存在下，加热至回流进行酯化反应，反应结束后，冷却、浓缩去除甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入萃取剂A萃取，取有机相依次经水洗、干燥、过滤、浓缩，得到中间体如式(Ⅲ)所示的化合物；
(2)将式(Ⅲ)所示的化合物、碱C的水溶液、N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯依次加入溶剂C中，于室温下进行酰胺化反应，反应结束后，浓缩除去溶剂C，加入萃取剂D，取有机相用饱和食盐水溶液洗涤、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅶ)所示的化合物；
(3)将式(Ⅶ)所示的化合物加入溶剂A中，在催化剂B的作用下，与Boc酸酐进行酰胺化反应，反应结束后，加入水和萃取剂B，取有机相水洗、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅷ)所示的化合物；
(4)将式(Ⅷ)所示的化合物加入溶剂D中，在供氢体H2、催化剂C的作用下进行催化氢化反应，反应结束后，催化剂C经过滤、溶剂D洗涤而除去，有机相浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅸ)所示的化合物；
(5)将式(Ⅸ)所示的化合物加入混合溶剂B中，在碱B的作用下进行水解反应，反应结束后，浓缩除去部分溶剂，加入萃取剂C，低温调节水层pH至5～7，萃取剂萃取，取有机相用饱和食盐水洗涤、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到式(Ⅵ)所示的化合物，即N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物；
(6)将式(Ⅵ)所示的化合物、碱C的水溶液、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯依次加入溶剂C中，于室温下进行酰胺化反应，反应结束后，浓缩除去溶剂C，加入萃取剂D，取有机相用饱和食盐水溶液洗涤、干燥、过滤、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到目标化合物，即式(Ⅰ)所示的N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸衍生物。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案二步骤(2)中的N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯与式(Ⅲ)所示的化合物的物质的量比为1.0～1.5:1，优选为1.0～1.2:1；碱为碳酸钠，其与式(Ⅲ)所示的化合物的物质的量比为1.0～2.0:1，优选为1.5～2.0:1；
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案二步骤(4)中的催化剂C为供氢体H2采用氢气球的形式参与反应；5-10％的钯-碳、10-20％的氢氧化钯-碳或钯-聚乙烯亚胺，优选为5-10％的钯-碳；溶剂D为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃，优选为甲醇、乙酸乙酯。
所述的一种色氨酸衍生物医药中间体的制备方法，其特征在于方案二步骤(5)中的碱为碳酸钾，其与式(Ⅸ)所示的化合物的物质的量比为1.0～2.0:1，优选为1.0～1.5:1。
通过采用上述技术，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)本发明所用原料价廉易得，所用试剂较环境友好；
(2)本发明的制备工艺简单，反应条件温和，后处理具有很好的可操作性；
(3)本发明的制备方法所得的产物收率和纯度较高，容易工业化生产。
具体实施方式
以下通过具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。所用原料和试剂均为市售产品。
实施例1
本发明中制备色氨酸衍生物医药中间体(I)的合成方案一如下：
(一)L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入L-色氨酸(4.085g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加二氯亚砜(4.758g，40mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入二氯甲烷萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到黄色油状物L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)4.348g，收率99.6％，产品HPLC纯度98.56％。
(二)L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入L-色氨酸(4.085g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加浓硫酸(4.511g，46mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入氯仿萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到白色固体L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)3.985g，收率91.3％，产品HPLC纯度98.70％。
(三)L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入L-色氨酸(4.085g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加浓硫酸(5.296g，54mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入二氯甲烷萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到白色固体L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)4.243g，收率97.2％，产品HPLC纯度98.94％。
(四)5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入5-甲基-L-色氨酸(4.365g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加二氯亚砜(5.948g，50mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入二氯甲烷萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到黄色油状物5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)4.571g，收率98.4％，产品HPLC纯度98.61％。
(五)5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入5-甲基-L-色氨酸(4.365g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加浓硫酸(5.884g，60mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入氯仿萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到白色固体5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)4.506g，收率97.0％，产品HPLC纯度98.32％。
(六)5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入5-甲基-L-色氨酸(4.365g，20mmol)和甲醇40mL，于-10℃冰浴下，缓慢滴加二氯亚砜(3.569g，30mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后升温至回流进行酯化反应，TLC监测反应结束。冷却，浓缩除去甲醇，加入饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH为8～9，加入氯仿萃取(3×20ml)，取有机层水洗(2×15ml)，无水硫酸钠干燥，经浓缩后得到黄色油状物5-甲基-L-色氨酸甲酯(Ⅲ-b)4.474g，收率96.3％，产品HPLC纯度98.27％。
(七)N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和四氢呋喃20mL，室温下加入吡啶(791mg，10mmol)，于-10℃冰浴下，缓慢滴加三氟乙酸酐(2.100g，10mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后转至室温进行酰化反应，TLC监测反应结束。浓缩除去四氢呋喃，水洗、过滤、烘干后得到白色固体N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-a)2.599g，收率82.7％，产品HPLC纯度99.24％。
(八)N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和四氢呋喃20mL，室温下加入三乙胺(1.012g，10mmol)，于-10℃冰浴下，缓慢滴加三氟乙酸酐(2.205g，10.5mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后转至室温进行酰化反应，TLC监测反应结束。浓缩除去四氢呋喃，水洗、过滤、烘干后得到白色固体N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-a)2.627g，收率83.6％，产品HPLC纯度99.60％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),9.94(d,J＝7.6Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.16(d,J＝2.2Hz,1H),7.09(t,J＝7.2Hz,1H),7.00(t,J＝7.4Hz,1H),4.60(m,J＝9.6,7.9,5.1Hz,1H),3.67(s,3H),3.32(dd,J＝14.8,5.1Hz,1H),3.20(dd,J＝14.7,9.8Hz,1H).
(九)5-甲基-N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入5-甲基-L-色氨酸甲酯(2.323g，10mmol)和四氢呋喃20mL，室温下加入三乙胺(1.518g，15mmol)，于-10℃冰浴下，缓慢滴加三氟乙酸酐(2.520g，12mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后转至室温进行酰化反应，TLC监测反应结束。浓缩除去四氢呋喃，水洗、过滤、烘干后得到白色固体5-甲基-N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-b)2.459g，收率74.9％，产品HPLC纯度99.31％。
(十)5-甲基-N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL三口烧瓶中加入5-甲基-L-色氨酸甲酯(2.323g，10mmol)和四氢呋喃20mL，室温下加入吡啶(1.424g，18mmol)，于-10℃冰浴下，缓慢滴加三氟乙酸酐(3.150g，15mmol)，保证反应液温度在室温以下，滴加完毕后转至室温进行酰化反应，TLC监测反应结束。浓缩除去四氢呋喃，水洗、过滤、烘干后得到白色固体5-甲基-N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(Ⅳ-b)2.571g，收率78.3％，产品HPLC纯度99.40％。
(十一)N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(3.143g，10mmol)和乙腈30mL，室温下再分别加入Boc酸酐(2.401g，11mmol)和4-吡咯烷基吡啶(148mg，1.0mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。加入水20ml，用二氯甲烷(2×20ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，再经重结晶纯化得到无色透明油状物N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-a)3.671g，收率88.6％，产品HPLC纯度98.45％。
(十二)N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(3.143g，10mmol)和四氢呋喃30mL，室温下再分别加入Boc酸酐(2.619g，12mmol)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(73mg，0.6mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。加入水20ml，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，再经重结晶纯化得到无色透明油状物N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-a)3.535g，收率85.3％，产品HPLC纯度98.56％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(d,J＝7.1Hz,1H),8.05(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝7.7Hz,1H),7.52(s,1H),7.34(t,J＝7.7Hz,1H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),4.73-4.66(m,1H),3.70(s,3H),3.32(dd,J＝14.9,4.6Hz,1H),3.18(dd,J＝14.9,10.3Hz,1H),1.61(s,9H).
(十三)5-甲基-N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入5-甲基-N-alpha-三氟乙酰基-L-色氨酸甲酯(3.283g，10mmol)和乙腈30mL，室温下再分别加入Boc酸酐(2.837g，13mmol)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(220mg，1.8mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。加入水20ml，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，再经重结晶纯化得到无色透明油状物5-甲基-N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅴ-b)3.359g，收率78.4％，产品HPLC纯度98.74％。
(十四)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.144g，10mmol)和甲醇35mL，再将碳酸钾(2.764g，20mmol)溶于水(35ml)中配制成浓度约为7％碳酸钾水溶液，再将碳酸钾水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入乙酸乙酯75ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)2.227g，收率73.2％，产品HPLC纯度97.51％。
(十五)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.144g，10mmol)和甲醇75mL，再将碳酸钾(4.146g，30mmol)溶于水(37ml)中配制成浓度约为10％碳酸钾水溶液，再将碳酸钾水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入乙酸乙酯75ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)2.502g，收率82.2％，产品HPLC纯度98.75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.03(d,J＝8.1Hz,1H),7.67(d,J＝7.7Hz,1H),7.59(s,1H),7.32(t,J＝7.7Hz,1H),7.24(t,J＝7.4Hz,1H),3.47(s,1H),3.30-3.27(m,1H),2.99-2.93(m,1H),1.62(s,9H).
(十六)5-甲基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入5-甲基-N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.284gg，10mmol)和甲醇45mL，再将氢氧化钠(800mg，20mmol)溶于水(15ml)中配制成浓度约为5％氢氧化钠水溶液，再将氢氧化钠水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入二氯甲烷45ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体5-甲基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-b)1.728g，收率54.3％，产品HPLC纯度97.01％。
(十七)5-甲基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入5-甲基-N-alpha-三氟乙酸基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.284g，10mmol)和甲醇50mL，再将碳酸钾(3.455g，25mmol)溶于水(20ml)中配制成浓度约为15％碳酸钾水溶液，再将碳酸钾水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入二氯甲烷50ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体5-甲基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-b)2.555g，收率80.3％，产品HPLC纯度98.42％。
(十八)N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(3.044g，10mmol)和四氢呋喃32mL，再将碳酸氢钠(1.680g，20mmol)溶于水(32ml)中配制成浓度约为5％碳酸氢钠水溶液，再将碳酸氢钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(3.373g，10mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。浓缩除去四氢呋喃，加入乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(3×15ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到白色晶状固体，再对白色晶体进行重结晶纯化，抽滤、烘干得到N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)4.250g，收率80.7％，产品HPLC纯度98.80％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),8.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.89(dd,J＝17.7,7.8Hz,3H),7.71-7.59(m,4H),7.42-7.32(m,3H),7.31-7.21(m,3H),4.41-4.31(m,1H),4.25-4.16(m,3H),3.24(dd,J＝14.8,4.3Hz,1H),3.08(dd,J＝14.8,10.3Hz,1H),1.57(s,9H).
(十九)N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(3.044g，10mmol)和乙酸乙酯30mL，再将碳酸钠(1.590g，15mmol)溶于水(30ml)中配制成浓度约为5％碳酸钠水溶液，再将碳酸钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(4.048g，12mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。反应液分液，有机相先用水(2×15ml)洗涤，再用饱和食盐水洗涤(1×15ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到白色晶状固体N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)4.079g，收率77.5％，产品HPLC纯度99.10％。
(二十)5-甲基-N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-b)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入5-甲基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(3.184g，10mmol)和乙酸乙酯19mL，再将碳酸氢钠(2.100g，25mmol)溶于水(19ml)中配制成浓度约为10％碳酸氢钠水溶液，再将碳酸氢钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(3.711g，11mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。反应液分液，有机相先用水(2×15ml)洗涤，再用饱和食盐水洗涤(1×15ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到白色晶状固体5-甲基-N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-b)4.145g，收率76.7％，产品HPLC纯度98.43％。
实施例2
本发明中制备色氨酸衍生物医药中间体(I)的合成方案二如下：
(一)L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)的制备
实施例2中的L-色氨酸甲酯(Ⅲ-a)的制备过程重复实施例1。
(二)N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和四氢呋喃20mL，再将碳酸钠(1.272g，12mmol)溶于水(20ml)中配制成浓度约为6％碳酸钠水溶液，再将碳酸钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯(2.492g，10mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。分液，有机相经水洗(1×10ml)、饱和食盐水洗涤(1×10ml)、干燥、过滤、浓缩得到棕黄色油状物N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)3.401g，收率96.5％，产品HPLC纯度99.47％。
(三)N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和乙酸乙酯20mL，再将碳酸钠(1.590g，15mmol)溶于水(14ml)中配制成浓度约为10％碳酸钠水溶液，再将碳酸钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯(2.617g，10.5mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。分液，有机相经水洗(1×10ml)、饱和食盐水洗涤(1×10ml)、干燥、过滤、浓缩得到棕黄色油状物N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)3.439g，收率97.6％，产品HPLC纯度99.75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(t,J＝5.6Hz,2H),7.30(s,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.10(t,J＝7.1Hz,1H),7.01(t,J＝7.3Hz,1H),5.05-4.97(m,2H),4.38-4.31(m,1H),4.04(q,J＝7.1Hz,1H),3.63(s,3H),3.20(dd,J＝14.5,5.2Hz,1H),3.06(dd,J＝14.5,9.3Hz,1H).
(四)N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和四氢呋喃20mL，再将碳酸钠(1.590g，15mmol)溶于水(10ml)中配制成浓度约为14％碳酸钠水溶液，再将碳酸钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯(2.741g，11mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。分液，有机相经水洗(1×10ml)、饱和食盐水洗涤(1×10ml)、干燥、过滤、浓缩得到棕黄色油状物N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)3.362g，收率95.4％，产品HPLC纯度99.58％。
(五)N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入L-色氨酸甲酯(2.183g，10mmol)和乙酸乙酯20mL，再将碳酸钠(2.120g，20mmol)溶于水(10ml)中配制成浓度约为17％碳酸钠水溶液，再将碳酸钠水溶液添加至反应液中，混合完毕后加入N-苄基琥珀酰亚胺碳酸酯(2.991g，12mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。分液，有机相经水洗(1×10ml)、饱和食盐水洗涤(1×10ml)、干燥、过滤、浓缩得到棕黄色油状物N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅶ-a)3.320g，收率94.2％，产品HPLC纯度99.65％。
(六)N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅷ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(3.524g，10mmol)和乙腈30mL，室温下再分别加入Boc酸酐(2.619g，12mmol)和4-吡咯烷基吡啶(119mg，0.8mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。加入水20ml，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，再经重结晶纯化得到无色透明油状物N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅷ-a)4.051g，收率89.5％，产品HPLC纯度98.64％。
(七)N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅷ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-L-色氨酸甲酯(3.524g，10mmol)和四氢呋喃30mL，室温下再分别加入Boc酸酐(2.401g，11mmol)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(73.302mg，0.6mmol)，维持室温进行反应，TLC监测反应结束。加入水20ml，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，再经重结晶纯化得到无色透明油状物N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅷ-a)3.797g，收率83.9％，产品HPLC纯度99.49％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(d,J＝8.2Hz,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝7.7Hz,1H),7.58(s,1H),7.37-7.32(m,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),7.28(s,1H),7.26(s,1H),5.01(s,2H),4.41(m,J＝9.7,4.7Hz,1H),4.04(q,J＝7.1Hz,1H),3.66(s,3H),3.18(dd,J＝14.7,4.5Hz,1H),3.04(dd,J＝14.7,10.0Hz,1H),1.62(s,9H).
(八)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.525g，10mmol)和甲醇40mL，再加入5％的Pd/C(即226mg)，在氢气球的参与下于室温下进行反应，需要注意置换反应瓶内的气体，TLC监测反应结束。Pd/C经过滤、甲醇洗涤而除去，有机相浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到无色透明油状物N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)1.614g，收率50.7％，产品HPLC纯度99.40％。
(九)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.525g，10mmol)和乙酸乙酯40mL，再加入10％的Pd/C(即453mg)，在氢气球的参与下于室温下进行反应，需要注意置换反应瓶内的气体，TLC监测反应结束。Pd/C经过滤、乙酸乙酯洗涤而除去，有机相浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到无色透明油状物N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)2.697g，收率84.7％，产品HPLC纯度99.35％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝8.2Hz,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.50(s,1H),7.32(t,J＝7.1Hz,1H),7.24(t,J＝7.0Hz,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,1H),3.67(dd,J＝7.0,6.0Hz,1H),3.58(s,3H),3.01(dd,J＝14.0,5.6Hz,1H),2.92-2.88(m,1H),1.63(s,9H).
(十)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.525g，10mmol)和甲醇40mL，再加入10％的Pd/C(即453mg)，在氢气球的参与下于室温下进行反应，需要注意置换反应瓶内的气体，TLC监测反应结束。Pd/C经过滤、甲醇洗涤而除去，有机相浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到无色透明油状物N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)2.426g，收率76.2％，产品HPLC纯度99.53％。
(十一)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的100mL二口烧瓶中加入N-alpha-苄氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(4.525g，10mmol)和乙酸乙酯40mL，再加入7％的Pd/C(即317mg)，在氢气球的参与下于室温下进行反应，需要注意置换反应瓶内的气体，TLC监测反应结束。Pd/C经过滤、乙酸乙酯洗涤而除去，有机相浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到无色透明油状物N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(Ⅸ-a)2.516g，收率79.0％，产品HPLC纯度99.60％。
(十二)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(3.184g，10mmol)和甲醇60mL，再将碳酸钾(1.382g，10mmol)溶于水(20ml)中配制成浓度约为6％碳酸钾水溶液，再将碳酸钾水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入乙酸乙酯60ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)2.830g，收率93.0％，产品HPLC纯度98.42％。
(十三)N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)的制备
在带有磁力搅拌、温度计的250mL二口烧瓶中加入N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸甲酯(3.184g，10mmol)和甲醇30mL，再将碳酸钾(1.658g，12mmol)溶于水(15ml)中配制成浓度约为10％碳酸钾水溶液，再将碳酸钾水溶液添加至反应液中，于室温下进行水解反应，TLC监测反应结束。浓缩除去甲醇，加入乙酸乙酯45ml，用10％的柠檬酸水溶液调节水层的pH至6左右，充分振摇，萃取，取有机层干燥、浓缩，浓缩后的产物经重结晶纯化，得到白色固体N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅵ-a)2.654g，收率87.2％，产品HPLC纯度97.87％。(十四)N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)的制备
实施例2中的N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸(Ⅰ-a)的制备过程重复实施例1。
最后应当说明的是，以上实施仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。
